O agente causador da tosse convulsa: o que causa a doença, patogênese, causas e microbiologia. Características microbiológicas do agente causador da tosse convulsa Características diferenciais da Bordetella

As primeiras informações históricas sobre a incidência da coqueluche remontam à Idade Média, quando foram descritas epidemias da doença na Holanda, França e Inglaterra.

Em 1906, o bacteriologista belga Jules Bordet e o cientista francês Octave Zhangou foram os primeiros no mundo a isolar e descrever o agente causador da doença, que mais tarde foi denominado bacilo Bordet-Gangou. Mais tarde, o gênero de bactéria Bordetella foi nomeado em homenagem a J. Bordet. A vacinação em massa contra a tosse convulsa começou em meados do século XX.

A tosse convulsa é um processo infeccioso agudo do sistema respiratório humano, que afeta a membrana mucosa dos brônquios, bronquíolos, bem como a laringe e a traquéia, acompanhada de tosse paroxística convulsiva. A tosse convulsa é causada pela bactéria Bordetella pertussis.

Características microbiológicas do agente causador da tosse convulsa

O gênero Bordetella inclui vários patógenos de doenças respiratórias humanas, dos quais Bordetella pertussis, o agente causador da tosse convulsa, e Bordetella parapertussis, o agente causador da parapertussis (uma doença clinicamente semelhante, mas ocorrendo de forma leve), são de primordial importância .

As bactérias desse gênero são gram-negativas (não retêm o corante quando coradas), têm formato de bastonete, são pequenas e imóveis.

O bacilo da tosse convulsa – Bordetella pertussis – caracteriza-se pelo seu pequeno tamanho (não ultrapassando 1 mícron), capaz de formar uma microcápsula protetora, e coberto por microvilosidades. A bactéria é capaz de se reproduzir apenas na presença de oxigênio (aeróbia) e é bastante exigente em meio nutriente. As colônias de tosse convulsa lembram pérolas ou gotículas de mercúrio: prateadas, pequenas, esféricas e em formato de cone.

Os principais elementos estruturais do bacilo da coqueluche - microcápsula protetora, microvilosidades, parede celular (membranas externa e interna) - carregam a carga antigênica do microrganismo e produzem toxinas, proporcionando resposta imunológica e manifestações clínicas da doença.

Ao contrário do verdadeiro agente causador da tosse convulsa, B.parapertussis é grande em tamanho, cresce em diferentes colônias em meio nutriente e, o mais importante, difere na estrutura de seus antígenos.

A estrutura antigênica das bactérias do gênero Bordetella é muito complexa. A cápsula contém 14 aglutinógenos (antígenos capsulares), chamados fatores. Assim, os fatores 1, 2, 3 são específicos para B. pertussis, o fator antigênico 14 é característico de B. parapertussis e o fator 7 é considerado comum a todo o gênero Bordetella.

No total, o bacilo da coqueluche possui 8 aglutinógenos, mas os principais são 1, 2 e 3. Dependendo da combinação desses antígenos em uma célula bacteriana, distinguem-se 4 sorotipos: 1,2,0; 1,0,3; 1,2,3; 1,0,0. Os dois primeiros sorotipos são mais frequentemente isolados de pacientes vacinados e pacientes com formas leves, o último - de pacientes com formas graves.

Fatores de patogenicidade do bacilo da coqueluche:

Na implementação da ação de uma célula bacteriana no corpo humano, os fatores de patogenicidade do bacilo da coqueluche desempenham um papel primordial.

Entre eles estão:

Epidemiologia da tosse convulsa

A fonte da infecção é uma pessoa doente (infecção antroponótica). Atualmente, o transporte da bactéria Bordetella não foi comprovado. O período de infecciosidade dura de 1 a 25 dias de doença.

Tradicionalmente, a tosse convulsa é chamada de “infecção infantil” porque na verdade, 95% dos casos da doença são detectados em crianças e apenas 5% em adultos. No entanto, há evidências de que o número real de casos da doença em adultos é superior ao das estatísticas oficiais. Isso se deve ao fato de os médicos serem pouco cautelosos ao examinar um adulto, devido aos seus preconceitos sobre a suscetibilidade a essa infecção em crianças. Além disso, em adultos a doença ocorre de forma apagada, sob o pretexto de uma infecção respiratória aguda, o que dificulta o diagnóstico.

O maior número de casos da doença é registrado na faixa etária menor de 1 ano. Isto se deve ao esquema incompleto de vacinação em bebês dessa idade e à sua alta suscetibilidade. Os alunos mais novos também são um grupo de risco: a imunidade pós-vacinação enfraquece significativamente por volta dos 5-7 anos de idade, portanto, entre as crianças desta faixa etária, muitos não imunes se acumulam, apoiando a circulação do patógeno.

O mecanismo de transmissão da tosse convulsa é o aerossol, a via de transmissão são as gotículas transportadas pelo ar.

A contagiosidade (infecciosidade) é muito alta e o índice de contagiosidade é de 70-100%. Na ausência de imunidade à tosse convulsa (se a pessoa não foi vacinada ou não esteve doente), a suscetibilidade aproxima-se dos 90%.

O agente causador da tosse convulsa é liberado massivamente no meio ambiente durante a tosse. Na tosse convulsiva, forma-se um aerossol grosso, que se instala rapidamente em um raio de 2 metros. A capacidade de penetração no trato respiratório é baixa: partículas de saliva e escarro ficam retidas no trato respiratório superior, onde o processo infeccioso não pode ocorrer. Portanto, é necessário um contato muito longo e próximo para se infectar com tosse convulsa.

A estabilidade ambiental é baixa. O bacilo da tosse convulsa morre rapidamente sob a influência dos raios ultravioleta e do calor (a uma temperatura de 50 graus morre em 30 minutos) e é rapidamente inativado por soluções desinfetantes ativas. Na expectoração seca em utensílios domésticos, ela morre rapidamente, mas na expectoração úmida pode permanecer viável por vários dias. Sazonalidade: outono-inverno com pico em novembro-dezembro.

A imunidade após a doença é tensa e persistente. A reinfecção é possível em casos de imunodeficiência, mas tais casos requerem investigação laboratorial.

Relevância da doença

A tosse convulsa é uma doença evitável por vacinação. No final dos anos 90. No século 20, começou um aumento gradual na incidência de tosse convulsa e, atualmente, a taxa de incidência está crescendo de forma constante. Assim, a taxa de incidência na Federação Russa em 2015 foi de 4,42 casos por 100.000 habitantes, em 2014 – 3,23 por 100.000, em 2012 – 3,15 por 100.000 habitantes. Em 2014, foi registrado 1 caso de morte.

Na estrutura por idade, a proporção de crianças menores de um ano em 2015 era de 82%, em 2014 – 54%.

Razões para o aumento da incidência de tosse convulsa:

Deve-se notar também que os números reais do número de doenças podem exceder significativamente os estatísticos, porque na realidade, nem sempre é possível diagnosticar a tosse convulsa: a doença pode ter um curso atípico, os sintomas podem ser semelhantes aos da tosse convulsa e nas cidades pequenas não existem métodos diagnósticos modernos.

Patogênese da tosse convulsa

O tempo desde a entrada da tosse convulsa no trato respiratório até o primeiro aparecimento dos sintomas (período de incubação) varia de 3 a 14 dias.

O epitélio é o local de fixação e proliferação de bactérias no trato respiratório. O processo é menos pronunciado na traqueia e laringe, mais pronunciado nos brônquios e bronquíolos.

O patógeno não aparece no sangue. O processo de reprodução dura 2 a 3 semanas e é acompanhado pela produção ativa de exotoxinas - adenilato ciclase extracelular e toxina pertussis. A toxina pertussis tem um efeito extremamente negativo nos sistemas respiratório, cardíaco, imunológico e nervoso. Há aparecimento de broncoespasmo pronunciado, vasoconstrição, que leva ao aumento da pressão arterial, e o componente celular da imunidade é significativamente inibido.

Após o término do ciclo reprodutivo, as bordetella são destruídas e um grande número de fatores patogênicos são liberados das células. Inicia-se um período catarral pré-convulsivo, com duração de 10 a 13 dias (quanto mais curto, pior o prognóstico). A membrana mucosa torna-se necrótica, destruída e podem aparecer úlceras. Formam-se tampões de expectoração purulenta, obstruindo o lúmen dos brônquios e alvéolos, o que pode contribuir para o seu colapso.

A exposição contínua do aparelho receptor do trato respiratório a toxinas bacterianas leva ao aumento da excitabilidade do nervo vago. Os impulsos nervosos entram constantemente na medula oblonga, resultando no aparecimento de um foco de excitação do centro respiratório - o dominante.

Como resultado, o reflexo da tosse torna-se autossustentável e não requer a participação de bactérias. A tosse torna-se espástica e convulsiva, característica da tosse convulsa. Pode aparecer a partir de qualquer irritante: dor, toque, etc. Começa um período de tosse espasmódica convulsiva, que dura de 1 a 1,5 semanas em pessoas vacinadas e até 6 semanas em pessoas não vacinadas.

Como muitos outros centros importantes de regulação da atividade vital estão localizados próximos ao centro respiratório, a excitação, espalhando-se para eles, causa vômitos, aumento da pressão arterial e espasmos dos músculos da face e do corpo.

Após uma tosse convulsiva, inicia-se gradativamente um período de recuperação, que dura de 2 semanas a 6 meses, dependendo do estado imunológico e das complicações.

As toxinas da coqueluche têm um efeito negativo na flora intestinal e na motilidade intestinal, o que leva à disbiose e à diarreia. Sabe-se que o estado de imunodeficiência secundária na tosse convulsa é causado pela apoptose das células do sistema imunológico. Isso explica a ocorrência frequente de pneumonia por clamídia, micoplasma e bronquite, e o desenvolvimento de obstrução brônquica.

Os agentes causadores destas doenças pertencem ao gênero Bordetella.

1. Bordetella pertussis - o agente causador da tosse convulsa, descrito por Bordet e Zhangu em 1906.

2. Bordetella parapertussis - o agente causador da parapertussis, descrito por Eldering e Kondrick em 1937.

3. Bordetella Bronchiseptica - causa doenças em animais. Nos humanos, essas bactérias causam broncopneumonia com tosse convulsa. Esta doença foi descrita pela primeira vez em humanos por Brown em 1926 (raro).

Morfologia. As bactérias da tosse convulsa são pequenos bastonetes de formato ovóide, 0,3-0,5 × 1-1,5 mícrons. O agente causador da tosse convulsa é um pouco maior. Ambos os micróbios não possuem esporos e são imóveis. Com coloração especial, a cápsula fica visível. Gram negativo. Eles são mais intensamente coloridos nos pólos.

As ultrasecções mostram uma concha semelhante a uma cápsula, grãos de moeda e vacúolos no nucleídeo.

Cultivo. Os agentes causadores da tosse convulsa e da tosse convulsa são aeróbios. Eles são meticulosos com os meios nutrientes. Para o seu cultivo, utiliza-se o meio Bordet-Giangu (ágar sangue glicerina-batata). Atualmente, utiliza-se meio CCA (ágar caseína-carvão) - este é um meio semissintético sem sangue. A fonte de aminoácidos aqui é o hidrolisado de caseína. O ambiente AMC difere do ambiente Bordet-Giangu por um método de fabricação mais simples e acessível.

Para inibir o crescimento da flora estranha, a penicilina é adicionada ao meio na proporção de 0,25 - 0,5 UI por 1 ml de meio ou meticilina - 2,5-4 μg por 1 ml. A penicilina pode ser aplicada na superfície da mídia em pratos.

Os meios inoculados são incubados em um termostato a uma temperatura de 35-36°C, pH 6,8-7,4. As colheitas devem ser protegidas do ressecamento; para isso, coloque um recipiente com água no termostato.

Colônias de B. pertussis aparecem após 48-72 horas e B. parapertussis - após 24-48 horas.

No meio KUA, as colônias de B. pertussis são pequenas, com 1-2 mm de diâmetro e B. parapertussis são um pouco maiores; As colônias de ambos os micróbios são brilhantes, de cor creme acinzentada (no ágar caseína-carvão elas se assemelham a gotículas de mercúrio). Quando as colônias são removidas, permanece um resíduo viscoso e cremoso. Ao examinar as colônias sob um microscópio estereoscópico, um cone de luz é visível (as colônias projetam uma sombra). Quando a posição da fonte de luz (lâmpada) muda, a sombra muda de posição. A presença de um cone de luz (cauda) tem valor diagnóstico.

B. parapertussis produz a enzima tirosinase, portanto, em meios contendo tirosina, ela é clivada e o meio fica marrom; Uma mudança na cor do meio é um sinal de diagnóstico diferencial.

Em um ambiente líquido, as bactérias pertussis e parapertussis formam turbidez uniforme e sedimentos de fundo. No ágar sangue, eles formam uma zona de hemólise.

As colheitas recentemente isoladas têm frequentemente uma forma suave em S (Fase I). Quando cultivada em condições desfavoráveis ​​ou em material colhido tardiamente na doença, podem surgir formas dissociadas (fases II-IV).

Propriedades enzimáticas. Os patógenos da tosse convulsa não decompõem carboidratos e não fermentam proteínas. As bactérias Parapertussis produzem as enzimas urease e tirosinase.

As bactérias coqueluche e parapertussis produzem enzimas de patogenicidade: hialuronidase, plasmacoagulase e lecitinase.

Formação de toxinas. Em experimentos com animais, quatro tipos de toxina proteica foram identificados no bacilo da coqueluche: 1) toxina dermonecrótica termolábil; 2) endotoxina termoestável; 3) fator estimulador da leucocitose (estimulante da leucocitose); sua administração parenteral causou a morte de animais experimentais; 4) fator de sensibilização à histamina - quando administrado a camundongos, sua sensibilidade à histamina aumentou.

Os dois primeiros tipos de toxina também são característicos do agente causador da tosse convulsa.

Estrutura antigênica. As bactérias do gênero Bordetella possuem uma estrutura antirênica complexa. Os antígenos mais importantes para o diagnóstico laboratorial são os aglutinogênios. O aglutinogênio genérico é 7. O aglutinogênio específico da espécie para Bordetella pertussis é 1, para Bordetella parapertussis - 14, para Bordetella bronchoseptica - 12.

Os soros monoespecíficos 1, 14, 12 são usados ​​para diferenciar espécies (os soros são produzidos pelo Instituto N. F. Gamaleya de Epidemiologia e Microbiologia).

Além dos antígenos específicos da espécie, os representantes da Bordetella também possuem outros aglutinogênios, cujas diferentes combinações determinam o sorovar (Tabela 48).

Com base na combinação dos três principais aglutinógenos 1,2,3, determinados numa reação de aglutinação com soros monoespecíficos, a B. pertussis distingue-se em três sorovares: 1,2,3; 1,2,0; 1,0,3.

Resistência a fatores ambientais. Os agentes causadores da tosse convulsa e da tosse convulsa são pouco resistentes. A uma temperatura de 56°C morrem em 20-30 minutos. As baixas temperaturas também têm um efeito prejudicial sobre eles. A luz solar direta os mata em 1-2 horas; Raios UV - depois de alguns minutos. Na expectoração seca, essas bactérias persistem por várias horas. As soluções convencionais de desinfetantes os destroem rapidamente.

Ambos os tipos de micróbios são pouco sensíveis aos antibióticos e não são sensíveis à penicilina.

Suscetibilidade animal. Em condições naturais, os animais não são suscetíveis aos patógenos deste gênero. Em condições experimentais, é possível reproduzir a tosse convulsa em macacos e cães jovens e causar a morte de camundongos.

Fontes de infecção. Um homem doente. Os pacientes no período catarral são especialmente contagiosos.

Rotas de transmissão. Caminho aéreo. O papel de vários objetos é improvável devido à instabilidade da bactéria coqueluche no ambiente externo.

Patogênese. Os agentes causadores da tosse convulsa e da tosse convulsa causam uma doença aguda acompanhada de tosse convulsiva. Uma vez na membrana mucosa do trato respiratório superior, as bactérias ali se multiplicam e são parcialmente destruídas. A toxina liberada atua no sistema nervoso central, irrita os receptores nervosos da membrana mucosa do trato respiratório superior, o que ativa o reflexo da tosse. Como resultado, ocorrem ataques de tosse convulsiva. Durante o processo da doença, observam-se vários períodos: tosse catarral, espasmódica e resolução do processo.

Imunidade. Após uma doença, desenvolve-se uma imunidade persistente, determinada por fatores humorais e celulares.

Prevenção. Identificação e isolamento de pacientes. Crianças debilitadas que estiveram em contato com alguém com tosse convulsa recebem imunoglobulina. As principais medidas de prevenção específicas são a imunização de crianças com DTP (vacina coqueluche-difteria-tétano). A vacina é administrada três vezes aos 6 meses de idade, seguida de revacinação.

Tratamento. Nos estágios iniciais da doença, é utilizada imunoglobulina anticoqueluche. Eritromicina e ampicilina são usadas para tratamento.

Perguntas de controle

1. Descrever as propriedades morfológicas do agente causador da tosse convulsa e da parapertussis.

2. Em que meio e qual é o padrão de crescimento dos micróbios da coqueluche e da parapertussis?

3. Estabilidade dos patógenos da tosse convulsa e da parapertussis no ambiente externo.

4. Características diferenciais dos patógenos da tosse convulsa e da tosse convulsa.

5. Fontes de infecção, vias de transmissão, patogênese da tosse convulsa.

Exame microbiológico

Objetivo do estudo: identificar o patógeno e diferenciar os patógenos da coqueluche da coqueluche.

Material para pesquisa

Descarga da membrana mucosa da nasofaringe.

Método principal de pesquisa

Microbiológico

Progresso do estudo

Segundo - terceiro dia de estudo

As culturas são retiradas do termostato e visualizadas com lupa ou microscópio binocular estereoscópico. Havendo colônias suspeitas, elas são isoladas em AMC: em placas de Petri, divididas em setores, ou em tubos de ensaio. As colheitas são colocadas em um termostato. Se houver muitas colônias, você pode fazer esfregaços com algumas delas, pintá-las e examiná-las ao microscópio. Se estiverem presentes pequenos bastonetes Gram-negativos, é realizado um teste de reação de aglutinação com soro genérico monoespecífico 7. Uma reação de aglutinação positiva indica que a cultura isolada pertence ao gênero Bordetella. Para determinar o tipo de Bordetella, é realizada uma reação de aglutinação com os soros das espécies monoespecíficas 1 e 14. As reações são realizadas em lâmina de vidro. Um resultado positivo da reação de aglutinação permite-nos dar uma resposta preliminar.

Quarto dia de pesquisa

As colheitas são retiradas do termostato e examinadas: primeiro a olho nu, prestando atenção na cor do meio (se houver coloração marrom), depois o crescimento é estudado em microscópio estereoscópico.

Se houver colônias suspeitas, são feitos esfregaços a partir da cultura isolada, corados com Gram e examinados ao microscópio. Em seguida, novamente (a partir de cultura pura), é realizada uma reação de aglutinação em vidro com soros monoespecíficos 1,2,3 e 14. Os resultados da aglutinação permitem diferenciar B. pertussis de B. parapertussis, e se for B. . coqueluche, então determine o sorovar: 1- 1º sorovar - (1,2,3), 2º sorovar - (1,2,0), 3º sorovar - (1,0,3). A determinação do sorovar tem importância epidemiológica.

Para identificação final da cultura isolada (com aglutinação positiva com soros monoespecíficos), é realizado um teste para presença de urease e inoculada em ágar inclinado contendo tirosina 0,1% (ver Fig. 49).

Teste para urease. 0,3-0,4 ml de uma solução de ureia a 2% são despejados em um pequeno tubo de ensaio, uma alça de cultura é adicionada e 2-3 gotas de fenolftaleína são adicionadas. O tubo de ensaio é agitado e colocado em um termostato. A reação é levada em consideração após 2 e 24 horas. As bactérias da coqueluche não alteram a cor do meio. A bactéria Parapertussis possui a enzima urease, que decompõe a uréia para formar amônia. A amônia altera o indicador e o meio fica vermelho.

Teste com tirosina. A cultura isolada é inoculada no MPA inclinado em tubos de ensaio com tirosina a 0,1% e colocada em termostato. No dia seguinte, retire o tubo de ensaio do termostato e inspecione-o. A presença de crescimento no tubo de ensaio e a coloração marrom do meio indicam o crescimento de patógenos parapertussis. Os patógenos da tosse convulsa não crescem neste meio.

Quinto dia de pesquisa

Se não houver colônias suspeitas, é dada uma resposta negativa.

Diagnóstico acelerado

Com o método de pesquisa bacteriológica, a resposta pode ser obtida em 3-4 dias.

1. A utilização do método imunoluminescente permite dar uma resposta várias horas após a retirada do material, identificando diretamente os micróbios em esfregaços feitos a partir de swabs.

2. Se não houver crescimento visível, pode-se fazer uma mancha-impressão a partir das inoculações em meio KUA: para isso, tocar a área de inoculação com uma rolha de borracha estéril e transferir a impressão para uma lâmina de vidro. O esfregaço da impressão digital é estudado por imunofluorescência. As bactérias B. pertussis ou B. parapertussis são encontradas em esfregaços.

Perguntas de controle

1. Qual é o material para pesquisa em caso de suspeita de tosse convulsa?

2. Quais métodos de coleta de material são utilizados para identificar o patógeno quando há suspeita de tosse convulsa?

3. O que é adicionado ao meio para suprimir o crescimento da microflora estranha?

1. Tome 10 xícaras de meio KUA, um frasco de penicilina contendo 300.000 unidades. Faça uma diluição de penicilina de modo que 0,1 ml contenha 7,5 unidades. Calcule a quantidade total de meio.

2. Colete as secreções nasofaríngeas umas das outras e cultive-as em meio KUA.

3. Pegue um copo com cultura de bactérias coqueluche ou parapertussis do professor e estude a natureza das colônias usando um microscópio estereoscópico. Semeie colônias suspeitas no setor do meio AMC (isolamento de cultura pura).

4. Retire do professor uma cultura pura de patógenos de coqueluche ou parapertussis cultivados no setor AMC do meio e realize uma reação de aglutinação com soro diagnóstico de coqueluche.

Se houver reação de aglutinação positiva, testar a presença de urease e inocular em meio com tirosina (0,1%).

Mídia cultural

AMC. A quarta-feira é elaborada pelo Instituto de Epidemiologia e Microbiologia que leva seu nome. NF Gamaleya. O meio AMC acabado é preto, a água de condensação não deve conter partículas de carvão. Depois de preparado, o meio pode ser armazenado por muito tempo (até um mês ou mais), evitando que resseque.

a) Para o diagnóstico microbiológico da coqueluche, o líder é método bacteriológico.

A semeadura é feita em meio Bordet-Zhangou e ágar caseína-carvão (CAA).

O agente causador da tosse convulsa cresce lentamente ao longo de 3-5 dias.

B.pertussis deve ser diferenciada de B.parapertussis (Tabela).

Tabela 17

Diferenciação de Bordetella

O patógeno é semeado em 70-80% das crianças durante a coleta de material durante as primeiras 2 semanas. Quanto mais tarde o material for retirado, menor será a probabilidade de detectar o patógeno. O método do “adesivo para tosse” é significativamente menos eficaz do que coletar o material com um cotonete.

b) Dentre as reações sorológicas, AR, RSK, RPGA, IFM, etc. são utilizados para diagnosticar a tosse convulsa. Atualmente, o IFM é utilizado com mais frequência. O diagnóstico é confirmado por um aumento nos títulos em 4 vezes ou mais ao examinar soros pareados.

Esquema 10. Diagnóstico microbiológico de tosse convulsa

Tabela 18

Preparações para prevenção e tratamento específico da difteria, tosse convulsa

Perguntas para autocontrole

Nome latino, propriedades morfológicas e tintoriais do agente causador da difteria.

Cite os biovares do bacilo da difteria. Por quais critérios eles são diferenciados?

Material para pesquisa, métodos de coleta em caso de suspeita de difteria e para teste de transporte bacteriano.

Diferenças entre o agente causador da difteria e outras corinebactérias (falso bacilo da difteria, difteróides)

Toxina diftérica, suas propriedades. Métodos para determinar a toxicidade do bacilo da difteria.

Imunidade para difteria.

Quais bactérias pertencem ao gênero Bordetella?

Métodos de diagnóstico microbiológico da tosse convulsa.

Preparações para prevenção e tratamento específicos da difteria e da tosse convulsa.

Nº 20 Patógenos da tosse convulsa e da tosse convulsa. Taxonomia e características. Diagnóstico microbiológico. Prevenção e tratamento específicos.
Coqueluche- doença infecciosa aguda caracterizada por danos ao trato respiratório superior, crises de tosse espasmódica; observada principalmente em crianças. O agente causador da tosse convulsa é Bordetella pertussis
Taxonomia. B.pertussis pertence ao departamento Gracilicutes, gênero Bordetella.
Propriedades morfológicas e tintoriais. B. pertussis é um pequeno bastonete gram-negativo ovóide com extremidades arredondadas. Não possui esporos ou flagelos, forma uma microcápsula, pili.
Propriedades culturais e bioquímicas. Aeróbico estrito. A temperatura ideal de cultivo é 37C. B. pertussis cresce muito lentamente apenas em meios nutrientes especiais, por exemplo, em meio Bordet-Giangu (ágar batata-glicerina com adição de sangue), formando colônias que se parecem com gotículas de mercúrio. A transformação R-S é característica. Eles quebram o glk. e lactose em ácido sem gás.
Estrutura antigênica. O antígeno O é termoestável e específico do gênero. 14 antígenos K capsulares termolábeis de superfície. B. pertussis possui 6 sorovares. O fator 7 é comum a todas as Bordetella. Para B. parapertussis, fator específico 14. Antígenos K são detectados em uma reação de aglutinação.
Fatores de patogenicidade. Endotoxina termoestável que causa febre; uma toxina proteica que possui atividade antifagocítica e estimula a linfocitose; enzimas agressivas que aumentam a permeabilidade vascular, têm efeito sensibilizador da histamina, propriedades adesivas e causam a morte de células epiteliais. Hemaglutinina, pili e proteínas da membrana externa também estão envolvidas na adesão bacteriana.
Resistência.
É muito instável no ambiente externo, sendo rapidamente destruído sob a influência de desinfetantes e outros fatores.
Patogênese.
Micróbios não invasivos (não penetram na célula alvo). A porta de entrada para a infecção é o trato respiratório superior. Aqui, graças aos fatores adesivos, a bordetella é adsorvida nos cílios do epitélio, multiplica-se, secreta toxinas e enzimas agressivas. Desenvolvem-se inflamação e inchaço da membrana mucosa e algumas células epiteliais morrem. Como resultado da irritação constante dos receptores do trato respiratório por toxinas, surge uma tosse. A sensibilização do corpo às toxinas da B. pertussis também é importante na ocorrência de ataques de tosse.
Clínica. O período de incubação é de 2 a 14 dias. No início da doença aparecem mal-estar, temperatura corporal baixa, tosse leve e coriza. Mais tarde, começam os ataques de tosse espasmódica, terminando com a produção de expectoração. Pode haver de 5 a 50 desses ataques por dia. A doença dura até 2 meses.
Imunidade. Após uma doença, a imunidade é estável e dura por toda a vida. Específicos da espécie (anticorpos contra B. pertussis não protegem contra doenças causadas por B. parapertussis. Diagnóstico microbiológico.
O material para estudo é o muco do trato respiratório superior; utiliza-se o método da “placa de tosse” (durante uma crise de tosse, uma placa de Petri com meio nutriente é colocada na boca da criança). O principal método diagnóstico é bacteriológico. Permite diferenciar o agente causador da coqueluche da coqueluche. Semeadura em meio nutriente sólido com antibióticos. Para identificar o patógeno, use uma reação de aglutinação em vidro com soro K. Para diagnóstico acelerado, utiliza-se RIF direto com soro fluorescente específico e material da faringe. Método sorológico - detecção de IgG e IgA contra hemagutinina filamentosa e contra toxina de B. pertussis.
Prevenção.
Vacina adsorvida contra coqueluche, difteria e tétano (DTP). Ele contém uma cultura morta de fase I de B. pertussis, toxina pertussis, aglutinogênios e antígeno capsular. A imunoglobulina humana normal é administrada a crianças não imunizadas em contato com pacientes para profilaxia de emergência. Está sendo desenvolvida uma vacina não celular com menos efeitos colaterais, contendo toxóide, hemaglutinina, pertactina e antígeno de microvilosidades. Tosse convulsa

causa Bordetella parapertussis. A tosse convulsa é semelhante à tosse convulsa, mas é mais leve. A parapertussis é onipresente e é responsável por aproximadamente 15% dos casos diagnosticados como tosse convulsa. A imunidade cruzada não ocorre nessas doenças. O agente causador da parapertussis pode ser diferenciado da B. pertussis pelas propriedades culturais, bioquímicas e antigênicas. A imunoprofilaxia para parapertussis não foi desenvolvida.

Instituição Educacional Orçamentária do Estado de Educação Profissional Superior “Universidade Médica do Estado de Ural” do Ministério da Saúde da Federação Russa Departamento de Microbiologia, Virologia e Imunologia

Orientações para exercícios práticos para alunos

1. Especialidade OOP 060301.65 Disciplina de Farmácia C2.B.11 Microbiologia

Tópico: Patógenos da tosse convulsa e da tosse convulsa.

2. Objetivos da aula: Estudar com os alunos as propriedades dos patógenos da tosse convulsa e da tosse convulsa, fatores de patogenicidade e patogênese das doenças causadas, métodos de diagnóstico, prevenção e tratamento da tosse convulsa e da tosse convulsa.

3.1. 3. Objetivos da aula:

3.2. Estudo das propriedades dos patógenos da tosse convulsa e da tosse convulsa.

3.3. Estudar os fatores de patogenicidade do patógeno e a patogênese da tosse convulsa.

3.4. Estudo de métodos de diagnóstico, prevenção e tratamento da coqueluche e da coqueluche.

4. implementação Duração da aula em horário letivo

5. Perguntas de segurança sobre o tema:

5.1. Propriedades morfológicas, tintoriais, culturais e bioquímicas dos patógenos da tosse convulsa e da parapertussis.

5.2. Fatores de patogenicidade dos agentes causadores da coqueluche, coqueluche e patogênese das doenças causadas.

5.3. Métodos de diagnóstico, prevenção e tratamento da tosse convulsa e da tosse convulsa.

6. Tarefas e diretrizes para sua implementação.

Durante a aula o aluno deverá:

6.1. Responda às perguntas do professor.

6.2. Participe na discussão dos temas em estudo.

6.3. Faça um trabalho independente.

Informações teóricas Tosse convulsa- doença infecciosa aguda do trato respiratório, principal

cujo complexo de sintomas são ataques de tosse convulsiva. A parapertussis é uma doença infecciosa aguda do trato respiratório, manifestada clinicamente como uma forma leve de tosse convulsa.

O agente patogénico – Bordetella pertussis – foi descoberto pela primeira vez em 1900 em esfregaços de expectoração de uma criança e depois isolado em cultura pura em 1906 por J. Bordet e O. Zhangou. Posteriormente, o patógeno foi denominado bacilo Bordet-Gengou.

O agente causador da parapertussis é Bordetella parapertussis.

Os agentes causadores da tosse convulsa e da parapertussis pertencem ao departamento Gracilicutes,

ordem Burkholderiales, família Alcaligenaceae, gênero Bordetella, espécie Bordetella pertussis (bastão Bordet-Gengou, agente causador da tosse convulsa) e Bordetella parapertussis (o agente causador da tosse convulsa).

Propriedades morfológicas e tintoriais . Bordetella são gram-negativas. O agente causador da tosse convulsa tem a forma de um bacilo ovóide (cocobactéria). O bacilo da parapertussis é maior. Bordetella é frequentemente encontrada isoladamente. Não formam esporos, formam uma cápsula. Fixo.

Propriedades culturais. Bordetella são aeróbios obrigatórios. A temperatura ideal de crescimento é de 35-36°C. Exigente em meio nutriente. Para cultivar o bacilo da coqueluche, utiliza-se o meio Bordet-Gengou (ágar batata-glicerina com adição de sangue e penicilina). Ele cresce na forma de colônias lisas, brilhantes e transparentes em forma de cúpula com tonalidade perolada ou metálica de mercúrio; Colônias lisas e convexas, de cor creme acinzentada e consistência viscosa, crescem em ágar caseína-carvão (CCA). As colônias da bactéria parapertussis não diferem em aparência das bactérias da tosse convulsa, mas são maiores.

Propriedades bioquímicas. Bordetella não fermenta carboidratos, não forma indol, não reduz nitratos a nitritos e causa hemólise dos glóbulos vermelhos.

Estrutura antigênica. Existem antígeno O somático termoestável e antígenos K capsulares termolábeis de superfície ou aglutinógenos (fatores 1-16).

Resistência. O agente causador da tosse convulsa morre rapidamente fora do corpo (dentro de algumas horas). Altamente sensível aos raios ultravioleta, desinfetantes e temperatura. A 50-55 O C morre em 30 minutos, quando ferve - instantaneamente. Sensível à polimixina, estreptomicina, tetraciclina. Resistente à penicilina e sulfonamidas.

1. Fatores de adesão:

Pili (fímbrias);

- hemaglutinina filamentosa;

- a pertactina é uma proteína da membrana externa da parede celular;

- aglutinógenos de cápsula.

Esses fatores promovem a adesão de bactérias ao epitélio ciliado do trato respiratório superior (brônquios, traqueia).

2. Toxinas de Bordetella:

a) Toxina pertussis (exotoxina termolábil da coqueluche). Liga-se às células, penetra nelas, provoca a acumulação de AMPc e a morte celular.

b) A adenilato ciclase extracelular (adenilato ciclase hemolisina) perturba a capacidade “digestiva” dos fagócitos.

c) A citotoxina traqueal causa necrose e descamação do epitélio ciliado.

d) A toxina dermonecrótica provoca uma reação inflamatória local no epitélio do trato respiratório.

e) A endotoxina termoestável estimula a produção de citocinas que danificam as células epiteliais do trato respiratório.

3. Enzimas de patogenicidade– hialuronidase, plasmacoagulase. Epidemiologia. Em condições naturais, apenas

Humano. Fonte de infecção com tosse convulsa e tosse convulsa – uma pessoa doente

forma típica ou apagada, principalmente no período anterior ao aparecimento da tosse espasmódica. Caminho de transmissão do patógeno - aerotransportado. Bordetella possui tropismo específico pelo epitélio ciliado do trato respiratório do hospedeiro. Pessoas de todas as idades são suscetíveis à infecção, mas crianças de 1 a 10 anos são mais suscetíveis. A tosse convulsa é mais grave em crianças do primeiro ano de vida.

Patogênese. A porta de entrada são as membranas mucosas da laringe, traqueia e brônquios. Bordetella não penetra na célula (micróbios não invasivos) e não entra no sangue.

O primeiro estágio é a adesão do patógeno à superfície celular.

O segundo estágio é o dano local ao tecido por toxinas microbianas. O patógeno se multiplica na superfície das células epiteliais, causando o desenvolvimento de fenômenos inflamatórios catarrais e a ocorrência de focos de necrose. O patógeno se espalha para as seções inferiores (pequenos brônquios, bronquíolos, alvéolos) pela via broncogênica. Não há bacteremia com tosse convulsa.

O terceiro estágio é o estágio das manifestações sistêmicas. A consequência das lesões necróticas é a irritação constante dos receptores das fibras aferentes do nervo vago; a excitação é transmitida para a área do centro da tosse, onde se forma um foco estacionário de excitação. Como resultado, desenvolve-se o principal complexo de sintomas da tosse convulsa – ataques de tosse convulsiva.

Clínica.

1. Período de incubação dura de 5 a 21 dias (em média 7 a 10

2. Período catarral caracterizada pelo aparecimento de tosse leve, coriza e febre baixa. A tosse não responde ao tratamento medicamentoso, intensifica-se gradativamente e ao final da segunda semana torna-se paroxística. Durante este período, o patógeno é liberado abundantemente do corpo. A duração do período catarral é de cerca de duas semanas.

3. Convulsivo (convulsivo, espasmódico, paroxístico)

período . Aparece o principal complexo de sintomas da tosse convulsa - ataques de tosse convulsiva e indomável, ocorrendo até 20-30 vezes ao dia. As convulsões podem se desenvolver sob a influência de estímulos específicos (micróbio, sua toxina) e inespecíficos (exame, som, luz, injeções, etc.). Os ataques terminam com a liberação de expectoração espessa e viscosa. A tosse é acompanhada por cianose da face e do corpo. Durante as crises de tosse, a postura do paciente é caracterizada por costas curvadas e língua saliente. Pode ocorrer asfixia devido a parada respiratória; Às vezes há uma ruptura dos músculos intercostais. A temperatura corporal geralmente permanece normal durante todo o período convulsivo. A duração do período convulsivo é de 4-6 semanas.

4. Período de extinção (resolução, recuperação) – o número de ataques diminui gradativamente, depois desaparecem; a condição está normalizada. A duração do período de extinção é de 2 a 4 semanas.

Imunidade. Após uma doença, forma-se uma imunidade humoral vitalícia.

Diagnóstico laboratorial. O método principal é bacteriológico. Para isolar uma cultura pura, utiliza-se como material o muco da parede posterior da faringe, que é semeado em meio AMC ou Bordet-Gengou. O material é retirado com um cotonete em forma de bico (pela boca) ou reto (pelo nariz) da parede posterior da faringe. A semeadura também pode ser feita pelo método “placa para tosse” (durante a tosse, um copo aberto com meio nutriente é levado à boca do paciente a uma distância de 8 a 10 cm). A cultura cultivada é identificada por propriedades culturais, bioquímicas e antigênicas.

EM usado como aceleradométodo imunofluorescente–RIF

Com material da garganta do paciente e soro fluorescente (permite obter uma resposta através 4-5 horas após a retirada do material).

Métodos sorológicos(reação de aglutinação, hemaglutinação indireta, fixação de complemento) são utilizadas como auxílio na identificação de formas atípicas, bem como no diagnóstico retrospectivo, uma vez que os anticorpos contra o patógeno não aparecem antes da terceira semana da doença.

Prevenção específica. Para prevenção específica da tosse convulsa, é utilizada a vacina adsorvida contra coqueluche-difteria-tétano (DPT), onde o componente coqueluche é representado por bactérias coqueluche mortas.

Para o tratamento são utilizados antibióticos (gentamicina, ampicilina, eritromicina, tetraciclina), que são eficazes no período catarral e não eficazes no período convulsivo da doença.

O agente causador da tosse convulsa, Bordetella parapertussis , aproxima-se do agente causador da tosse convulsa em características morfológicas e culturais. A parapertussis manifesta-se clinicamente como uma forma leve de tosse convulsa. O diagnóstico só é possível com a ajuda de métodos de pesquisa microbiológica. A coleta de material e o diagnóstico laboratorial são realizados da mesma forma que para a coqueluche. A tosse convulsa e a tosse convulsa são duas doenças independentes. Crianças que tiveram tosse convulsa podem ter tosse convulsa e vice-versa.

Depois da discussão Para questões teóricas, o professor explica o procedimento para a realização de trabalhos independentes.

Trabalho independente:

Desenhe um diagrama do diagnóstico laboratorial da tosse convulsa em sua apostila.

7. Avaliação de conhecimentos, competências e habilidades sobre o tema da aula:

As respostas às perguntas e atividades em sala de aula são avaliadas em um sistema de 5 pontos.

8. Literatura para preparação do tema:

8.1. Principal:

1. Galynkin V., Zaikina N., Kocherovets V. Fundamentos de microbiologia farmacêutica. 2008.

2. Microbiologia médica, virologia e imunologia: um livro didático para estudantes de medicina. Ed. A.A. Vorobyova. Livros didáticos e livros didáticos ajudas ao ensino superior. Editora: Agência de Informação Médica, 2012. – 702 p.

3. Microbiologia: livro didático. para estudantes de instituições superiores. prof. educação, alunos da especialidade 060301.65 “Farmácia” / ed. V.V. Zvereva, M.N. Boychenko. – M.: GEOTAR-Media, 2012. – 608 pp.: il.

4. Odegova TF, Oleshko G.I., Novikova V.V. Microbiologia. Livro didático para universidades e faculdades farmacêuticas. - Perm, 2009. - 378 p.

8.2. Adicional:

1. Korotyaev A.I. Microbiologia médica, imunologia e virologia: livro didático para estudantes de medicina. universidades / A.I. Korotyaev, S.A. Babichev. - 5ª ed., Rev. E

adicionar. – São Petersburgo: SpetsLit, 2012. – 759 p.: Il.

2. Microbiologia médica: livro didático. 4ª edição. Pozdeev OK. /Ed. DENTRO E. Pokrovsky. – 2010. – 768 p.

3. Manual de Microbiologia Médica. Microbiologia geral e sanitária. Livro 1 / Col. autores // Editado por Labinskaya A.S., Volina E.G. – M.: Editora BINOM, 2008. – 1080 pp.: il.

As diretrizes foram revisadas e complementadas pelo Professor N.V. Litusov.

Discutido em reunião do Departamento de Microbiologia, Virologia e Imunologia.