Лабораторная диагностика бешенства. Бешенство у людей и животных Обнаружение телец Бабеша-Негри

Тони Негри НАСТУПАЕТ ЛИ КОНЧИНА ГОСУДАРСТВА-НАЦИИ. «ИМПЕРИЯ» КАК ВЫСШАЯ СТАДИЯ ИМПЕРИАЛИЗМА Перевод Монд Дипломатик Опубликовано в газете «Mond Dimplomatique» Две базовые идеи лежат в основании книги «Империя», которую я написал совместно с Майклом Хардом в промежуток времени

Пьедестал тельца Пьедестал тельца Вера Галактионова, Екатерина Глушик 11.07.2012

Культивирование и репродукция

Патогенез и иммунитет

Эпидемиология

Профилактика

Бешенство

Лабораторная диагностика

Метод флуоресцентных антител

Обнаружение телец Бабеша-Негри

Метод обнаружения включений Бабеша-Негри

Биопроба на мышах

Серологические исследования

Описание:

Бешенство – это острое зоонозное заболевание вирусной этиологии, которым болеют   теплокровные животных и человек. Для заболевания характерно прогрессирующее поражение центральной нервной системы и 100% летальность.

Причины возникновения:

Бешенство – вирусное инфекционное заболевание. Нейротропный вирус относится к семейству Лисовирусов. Имеют пулевидную форму. Вирус имеет однонитчатую РНК.
Существует 2 вида вируса бешенства: циркулирующий в естественных условиях среди животных уличный (дикий) и фиксированный вирус - применяется для получения антирабической вакцины.
Репликация (размножение) вируса бешенства в нервных клетках сопровождается формированием телец Бабеша-Негри. Вирус бешенства неустойчивый во внешней среде, и погибает через 2 минут кипячения.
Резервуаром служат плотоядные животные – лисы, енотовидные собаки, кошки, собаки. Летучие мыши, которые и выделяют вирус во внешнюю среду. Наиболее высокая вероятность заражения наблюдается в весеннее-летний период.
Бешенство распространено по всему земному шару, однако не встречается в Антарктиде, Австралии, островных государствах, а так же в Швеции, Испании, Норвегии и некоторых других государствах.

Патогенез:

Входными воротами для вируса служат повреждения кожных покровов и слизистых оболочек. Из места внедрения рабический вирус распространяется по периневральным пространствам, достигает центральной нервной системы, где фиксируется и начинает реплицироваться в нейронах, продолговатом мозге, гипокампе, узлах основания мозга, локализируется в спинном мозге. Это обеспечивает повышение рефлекторной возбудимости, и связанное с этим развитие параличей. Наблюдаются дыхательной мускулатуры, связанные с поражением блуждающего, языкоглоточного и подъязычного черепно-мозговых нервов. Раздражение симпатической нервной системы обуславливает повышенное слюно- и потоотделение. Поражение блуждающего нерва обеспечивает нарушение в работе сердечно-сосудистой системе. Из центральной нервной системы вирус «отсеивается» в различные органы, в первую очередь слюнные железы, надпочечники, почки, скелетные мышцы, кожу, сердце, вследствие чего происходят дистрофические изменения миокарда, кровоизлияния в слизистых и серозных оболочках.

Симптомы:

Инкубационный период длится от 10 до 90 дней. Продромальные явления длятся от 1 до 3 дней. Первые признаки – на месте укуса – припухлость, покраснение раны, рубца, зуд, неврологические боли по ходу нервных путей, расположенных вблизи к месту укуса. Беспокоит недомогание, повышенная чувствительность к слуховым и зрительным раздражителям, нарушение сна с кошмарами. Больной испытывает беспричинный страх.
Через 2-3 дня начинается период разгара заболевания. Появляется и , расстройства дыхания и глотания. В паралитический период заболевания наблюдается уменьшение всех симптомов, психическое успокоение, прекращение гидрофобии и аэрофобии, появляется возможность пить и есть. Эта фаза называется также «зловещее успокоение».
Далее развиваются параличи верхних и нижних конечностей, черепно-мозговых нервов. Развитие чаще всего идет по типу восходящего паралича Ландри. Нарушается функция тазовых органов.   Температура тела повышается до 42С. Смерть наступает от паралича сердечного или дыхательного центра. Общая продолжительность заболевания – от 3 до 7 дней.

Диагностика:

В диагностике бешенства очень важную роль играет эпиданамнез. При беседе пациент или родственники могут сообщить о недавнем контакте с животными.
Материал для посмертной диагностики – биоптаты кожи, мозга.
В срезах мозга можно обнаружить эознофильные тельца Бабеша-Негри, рамер их составляет до 10 мкм. Эти тельца предсталяют сосбой скопление вирусных нуклекапсидов.
Используется метод иммунофлюорисценции, постановка биологической пробы.
Современным методом диагностики заболевания является обнаружение вирусного антигена в отпечатках, снятых с оболочки глаза.

Лечение:

Для лечения назначают:

Бешенство – заболевание со 100% летальностью, и патогенетического лечения не существует.
Возможно назначение лишь симптоматического лечения – обезболивающих, противосудорожных, снотворных средств. На этапе развития дыхательных расстройств показано проведение .
В медицине известно лишь несколько клинических случаев излечения от бешенства, когда уже начались проявления заболевания.
Так, в США в 2005году больная бешенством Джина Гис была введена в искусственную кому на фоне применения иммуностимуляции. После проведенной недели в коме девушка выписалась из больницы с выздоровлением. Данный метод лечения был назван Милуокским протоколом, однако он дает эффективный результат далеко не во всех случаях.  

Профилактика:

Разработаны первичные и вторичные профилактические меры в отношении бешенства.
С целью первичной профилактики проводится вакцинация всех домашних и сельскохозяйственных животных. Необходимо своевременное обнаружение природных очагов инфекции и их уничтожение.

Профилактическая иммунизация показана лицам, чья профессия связана с повышенным риском заражения бешенством, например, охотники, ветеринары, лесники и т.д.  

Если укус животным все-таки произошел, то животное следует доставить к ветеринару для осмотра. Такое животное подлежит обязательному 10-дневному карантину. Если в указанный срок животное осталось живым и не изменило своего поведения, то вероятно, оно здорово и риска заболеть нет. В противном случае надо немедленно начинать экстренную профилактику бешенства.  

К методам неспецифической профилактики следует отнести асептическую обработку раны. Место укуса обрабатывают проточной водой, мылом, глубокие повреждения необходимо промыть при помощи катетера. Рану следует вести открытым способом, без наложения швов.

Специфическая профилактика бешенства предполагает введение комбинации иммуноглобулина и антирабической вакцины.
Самым эффективным методом является пассивная иммунизация антирабическим иммуноглобулином или антирабической сывороткой с последующей активной иммунизацией (вакцинацией). Пассивную и активную иммунизацию проводят одновременно, вводя препараты в разные места.

Показания к введению антирабической вакцинации.
Вакцинопрофилактику следует немедленно начать в следующих ситуациях:
- при всех укусах и других повреждениях кожного покрова, ослюнении кожи и слизистых оболочек, нанесенных животным с симптомами бешенства, подозрительными на бешенство или неизвестными животными;
- если рана была нанесена предметом, загрязненным мозгом или слюной бешенного животного;
- если одежда при укусе повредилась зубами животного;
- укус был осуществлен через тонкую или вязанную ткань;
- при укусах, ослюнении и нанесении здоровым в момент контакта животным, если оно в течение 10 дней после этого заболело, погибло или исчезло;
- укус произведен дикими грызунами;
- при явном ослюнении или повреждении кожных покровов человеком с диагностированным бешенством.

Прививки не проводят, если:
- укус произошел через очень плотную или многослойную одежду;
- нанесение повреждений не хищными птицами;
- укус нанесен домашними мышами или крысами в неэпидемических по бешенству районах; - при случайном употреблении термически обработанного мяса и молока бешеных животных;
- если в течение периода наблюдения животное не заболело;
- укус произведен раньше, чем 10 дней до предполагаемого заражения животного;
- при легком ослюнении и неглубоких укусах, которые были нанесены животными без клинических проявлений бешенства, при благоприятных данных (малая вероятность случая бешенства для   данного района, изолированное содержание животного, укус был спровоцирован пострадавшим, животное   вакцинировано против бешенства). Но и в этом случае за животным устанавливают наблюдение сроком на 10 дней с целью начать прививки в случае проявления у животного симптомов бешенства, а также гибели или исчезновения;
- при спровоцированном ослюнении неповрежденных кожных покровов неизвестным домашним животным в благополучных по бешенству областях;
- в случаях контакта с человеком, больным бешенством, при отсутствии явного ослюнения слизистых оболочек или повреждения кожных покровов.

С целью активной иммунизации вакцину вводят внутримышечно по 1 мл 5 раз по следующей схеме: в день инфицирования, затем на 3, 7, 14 и 28-й день. При вакцинации по этой схеме удается достичь удовлетворительного иммунитета. По рекомендациям Всемирной Организации Здравоохранения следует провести еще 6-ю   рекомендует инъекцию через 90 дней после первой.

В месте инъекции могут проявляться побочные эффекты - болезненность, отечность и уплотнение мягких тканей. Иногда эти реакции проявляются в более выраженной форме. Кроме того, возможно повышение температуры до 38 С и выше, артриты, увеличение лимфоузлов. Может беспокоить головная боль, общая слабость, и аллергические реакции.

Прививки против бешенства можно проводить как в амбулаторных условиях, так и стационарно. Госпитализация рекомендована лицам с тяжелыми укусами, жителям сельских районах; лица, прививающиеся повторно; лица, страдающие заболеваниями нервной системы, сопутствующей аллергией; беременные, а также лица, привитые другими препаратами в течение предшествующих двух месяцев.

Особое внимание стоит уделить вакцинации на фоне приема цитостатиков и кортикостероидов. В таком случае необходимо провести исследование уровня антител с целью решения вопроса о дополнительной вакцинации.

Во время проведения активной иммунизации нужно следить за состоянием пациента. При жалобах на ухудшение состояния показана госпитализация, а проведение прививок временно приостанавливается. Пациента необходимо проконсультировать у смежных специалистов – терапевта и невролога. Дальнейшее проведение вакцинации решается комиссионным осмотром в составе невролога, рабиолога и терапевта.

Во время курса вакцинации и в течение 6 месяцев после него нельзя употреблять алкогольные напитки. Это необходимо для обеспечения должного уровня поствакцинального иммунитета и предупреждения поствакцинальных реакций.

Использование иных вакцин одновременно с антирабической не допускается, только в   случае необходимости может быть проведена экстренная профилактика . Заболевшим бешенством вакцинацию не проводят.

Бешенство (Rabies) – инфекционное заболевание, опасное для животных и человека. Данное заболевание встречается во всех странах мира. Характеризуется 100% летальным исходом.

Возбудитель – РНК-содержащий вирус, относящийся к семейству Рабдовирусов. Данный вирус имеет тропность к нервной ткани. В наибольших титрах обнаруживается в головном мозге больных животных. Кроме того, находят вирусы и в спинном мозге, слюнных и слезных железах.
Различают:

1. «дикий» вирус, который циркулирует в естественных условиях и характеризуется высокой патогенностью для человека и животных.
2. И «фиксированный», полученный в лабораторных условиях, не патогенный для животных и человека при экстраневральном введении.

Вирус бешенства не устойчив к высоким температурам: при 60С о инактивируется через 10 минут, при 100С о - почти мгновенно. Но вот в замороженном мозге может сохранять жизнеспособность до нескольких месяцев. Также сохраняется несколько месяцев в гниющих тканях. Устойчив к действию растворов йода. Но быстро инактивируется дезрастворами на основе формалина, хлорамина и щелочи.

Эпизоотологические данные.

К вирусу бешенства восприимчивы все теплокровные. Наибольшей чувствительностью обладают дикие собачьи (такие как: лисицы, песцы, волки, енотовидная собака, шакалы), куньи, грызуны кошки. Менее восприимчивы птицы.

В дикой природе резервуарами вируса бешенства являются хищные животные и летучие мыши, в городе - бродячие собаки.
Источником заражения являются больные животные, у которых вирус выделяется со слюной. Наличие вируса в слюне отмечают уже за 8-10 дней до появления признаков болезни. Заражение происходит при укусе, при попадании слюны на слизистые оболочки или на поврежденные участки кожи.

Патогенез .

После проникновения в организм вирус начинает размножаться в месте внедрения. И через 24 часа начинает проникать в нервную ткань. В нервах он продвигается в направлении спинного и головного мозга со скоростью 7 см/день. Добравшись до мозга вирус начинает усиленно размножаться, затем по нервам вирус попадает во все органы и в первую очередь в слюнные железы и глаза. Инкубационный период (от момента заражения до появления клинических признаков) составляет в среднем 14 – 60 дней, иногда может достигать 6-12 месяцев.
Клинические признаки.

Различают 3 вида течения болезни.

1. Классическое трехэтапное течениеили буйная форма . Вначале отмечается изменение поведения животного (1 этап), оно становится очень ласковым или наоборот пугливым, необщительным. Этот этап может длиться от нескольких часов до 4 дней. Затем наступает следующий этап - возбуждения (2 этап), который продолжается 1-4 дня. Животные становятся агрессивными, склонны к блуждающим передвижениям и нападением на животных и людей. Развивается анорексия, беспокойство, слюнотечение. И за 3-4 дня до смерти развиваются паралитическая, или депрессивная, стадия, характеризующаяся прогрессирующими параличами.
2. Паралитическая, или тихая, форма. Характеризуется развитием параличей без предшествующей стадии возбуждения. При этой форме отмечают слюнотечение, отвисание нижней челюсти, затрудненное глотание, анорексию. Затем развивается паралич мышц туловища и конечностей. Смерть животного наступает через 3-4 дня.
3. «Атипичное бешенство». Это хроническое субклиническое (без развития симптомов) течение болезни, которое может длиться до 3 месяцев.

Диагноз .

Предварительный диагноз ставят на основании анамнеза и клинических симптомов. При подозрении на бешенство после смерти животного в лабораторию направляют труп животного. При невозможности этого – голову или головной мозг. При взятии материла необходимо соблюдать строгие меры предосторожности!
Лабораторная диагностика бешенства включает в себя несколько методов исследования.

1. Обнаружение телец Бабеша-Негри. Для постановки диагноза на бешенство в лаборатории проводят гистологическое исследование головного мозга умершего животного. Отмечают наличие рабических узелков в структурах дна четвертого желудочка мозга и наличие в головном мозге телец Бабеша-Негри (цитоплазматические эозинофильные включения, состоящий из частиц вируса бешенства). Их можно обнаружить в гипокампе, корковых и стволовых структурах мозга, в мозжечке и дорсальных ганглиях спинного мозга и эпителии роговицы глаза. Однако если тельца Бабеша-Негри не обнаруживаются, бешенство не исключается.
2. Выявление антигена методом флюоресцирующих антител (МФА) или методом иммунофлюоресцентного анализа (ИФА). Кроме этих реакций в настоящее время идет разработка нового метода диагностики в полимеразной цепной реакции (ПЦР).
3. Биологическая проба с заражением новорожденных мышат вирусом из взвеси головного мозга, слюнных желез.

Согласно законодательству РФ, в случаях покусов людей собаками или другими животными (кроме явно больных бешенством) пострадавшие должны немедленно обратиться в медицинские учреждения. А покусавшие их животные должны быть доставлены в ближайшее государственное ветеринарное учреждение для осмотра специалистами и карантина в течение 10 дней.

Для профилактики распространения бешенства предусмотрена ежегодная обязательная вакцинация собак и кошек антирабическими вакцинами.

В настоящее время для ввоза животных в ряд стран требуется документ подтверждающий количество валидных антител к вирусу бешенства. Для эффективной защиты от бешенства минимальный уровень вируснейтрализующих антител в крови должен составлять не менее 0,5 МЕ/мл. Данный вид исследования не является диагностическим и предназначен только для определения напряженности иммунитета против бешенства.
В Москве сдать кровь для определения титра антител к вирусу бешенства можно в Центре Молекулярной Диагностики, расположенном на Звенигородском шоссе, д.5. ЦДМ получил международную аккредитацию на проведение данного теста и выдает Международные сертификаты, действительные в течение всей жизни животного при соблюдении сроков ревакцинации.

Определение титров антител проводят не ранее чем через 30 дней после вакцинации. Поэтому если Вы планируете выезжать со своими питомцами в страны ЕС или другие страны, то необходимо заранее позаботиться о вакцинации и сдаче крови на этот тест (результаты выдаются через 7-14 дней).

Врач-лаборант ветеринарной лаборатории
«БиоВетЛаб» Лазарева Н.В.