Обратна реакция на Кумбс. Инструкции за употреба на „Набор от реагенти за определяне на антигени и антитела на системата Rhesus в човешка кръв“ (ags за теста на Coombs)

Директен тест на Кумбс. Този тест се използва за доказване на наличието на блокиращи антитела, фиксирани в червените кръвни клетки на детето. Положителният директен тест показва сенсибилизация и служи като убедителен знак хемолитична болестновородено дори преди появата на други клинични признаци. По изключение и само в много тежки случаидиректният тест на Coombs може да бъде отрицателен поради вече настъпилата, почти пълна хемолиза на сенсибилизирани червени кръвни клетки.

Директният тест на Кумбс се извършва по следния начин: 5 капки кръв, взета от петата на детето, се поставят в епруветка и се добавят 5 мл. физиологичен разтвор. Разбъркайте добре и центрофугирайте за 10 минути. Отделно бистра течностнад еритроцитния седимент. След това отново добавете 5 ml физиологичен разтвор, разбъркайте и центрофугирайте. След трикратно смесване с физиологичен разтвор червените кръвни клетки се измиват добре. След последното отделяне на супернатанта, еритроцитната утайка в количество 0,1 ml се смесва с 0,9 ml физиологичен разтвор. Нанесете 2-3 капки от тази смес върху предметно стъкло и добавете една капка серум на Coombs. Наличието на аглутинация показва, че реакцията е положителна (положителен директен тест на Coombs). Изследването трябва да се проведе при стайна температура над 16°, за да се избегне ефектът на студените аглутинини.

Индиректен тест на Кумбсслужи като доказателство за наличието на свободни антитела в майчиния серум и се извършва с майчин серум.

Хемолитичната болест при новородено с Rh несъвместимост обикновено се проявява след втората бременност. Първото дете се ражда здраво, второто с признаци на лека анемия и едва след третата бременност се раждат деца с ясни знацихемолитична болест. Само предварително сенсибилизирани жени могат да родят дете със симптоми на хемолитична болест през първата бременност. В някои случаи имунизацията причинява аборти и мъртвородени деца. За началото и тежестта на заболяването значение има състоянието на плацентата и продължителността на експозиция на майчините аглутинини върху плода. Когато аглутинините се появят 10-14 седмици преди раждането, детето обикновено изпитва субклинични форми. Ранната поява на аглутинини, 15-26 седмици преди раждането, причинява тежки формизаболявания. При всички форми на заболяването основният процес е хемолизата. Последицата от реакцията антиген-антитяло е хемолиза, увреждане на черния дроб и мозъчните капиляри. В зависимост от това коя лезия преобладава има и различни формизаболявания. Някои анафилактични явления също са опасни. Те водят до образуването на хистаминоподобни субстанции, причиняващи тежки увреждания на чернодробните клетки и особено на ганглиозните клетки на базалните ганглии, амоновия рог, продълговатия мозък и дори мозъчната кора. Когато чернодробните клетки са увредени, чернодробната жълтеница се добавя към екстрахепаталната жълтеница. Децата умират поради тежки симптоми на керниктер. Ако оцелеят, симптомите на лезиите остават нервна система(нарушения на екстрапирамидната система с хореоатетотични движения, особена танцуваща походка, принудени движения на главата, понякога нарушение на координацията на произволните движения с чести падания, повишен тонусмускули, умствена изостаналост, т. е. с признаци на т.нар. енцефалопатия posticteria infantum).

РЕАКЦИЯ НА КОМБЕС(R. R. A. Coombs, английски имунолог, роден през 1921 г.; синоним: тест на Кумбс, антиглобулинов тест ) - имунологична реакция за откриване на непълни антитела срещу авто- и изоантигени на еритроцитите.

Реакцията е разработена през 1908 г. от S. Moreschi, но получена широко приложениеедва от 1945 г., след като Coombs демонстрира ролята си при определяне на съвместимостта по време на кръвопреливания, Rh конфликт, диагностика на автоалергични и автоимунни състояния и др.

К.р. се основава на използването на специално приготвено лекарство - антиглобулинов серум. В присъствието на антиглобулинов серум червените кръвни клетки, натоварени с непълни антитела, аглутинират. Червените кръвни клетки, които не съдържат антитела на повърхността си, остават неаглутинирани.

К.р. се използва широко за: а) установяване на състоянието на изосенсибилизация, т.е. откриване на изоантитела, които се появяват по време на повтарящи се кръвопреливания (вижте Кръвопреливане) или бременност (вижте Бременност); б) извършване на тест за съвместимост при хемотрансфузии; в) определяне на вида на Rh фактора в еритроцитите (виж); г) откриване на автоимунни антитела върху червените кръвни клетки на пациенти с придобита хемолитична анемия (виж) и други автоалергични заболявания (виж), както и при някои инфекции, протичащи с алергичен компонент; д) откриване на изоимунни антитела, фиксирани върху червените кръвни клетки на деца, страдащи от хемолитична болест на новородени (виж). К.р. също се използва в криминалистични и антропологични изследвания.

Основният материал за постановка на K. r. са серум или цитратна плазма и червени кръвни клетки на пациента. Има два варианта на К. р.: косвен и директен. С непряка K. r. Изследва се серумът на пациента и се определят свободно циркулиращите антитела. С директен K. r. изследвайте червените кръвни клетки за наличие на антитела, фиксирани върху тях профилирани елементикръв.

Антиглобулинов серум за K. r. получени от имунизационна лаборатория. животни (зайци, кози, овце и др.) с глобулини, изолирани от човешки серум чрез фракциониране с етанол, амониев сулфат или гел филтрация върху Sephadex. При получаване на антиглобулинов серум е необходимо да се отстранят хетероаглутиниращите антитела в резултат на имунизация на животни с човешки глобулини. Това се постига чрез адсорбция на имунен серум със смес от еритроцити от хора с различна групакръв или разреждането й с изотоничен разтвор на натриев хлорид. IN последният случайтитърът на хетеро-аглутинините трябва да бъде нисък (1: 16 - 1: 32), така че антиглобулиновият серум след разреждане да запази добра активност в K. r.

Непряка реакция на Кумбс

Индиректната реакция на Coombs се провежда на два етапа. Първият етап се провежда в специално предназначени за тази цел малки епруветки с размери 4 X 0,5 см. Във всяка епруветка добавете една капка до три капки серум (цял, 1:2 и т.н.), в който се установява наличието на антитела се предполага седимент от еритроцити с известен антигенен състав. Съдържанието на епруветката се смесва и се поставя в термостат при t° 37° за 1 час. След това червените кръвни клетки се промиват три пъти с изотоничен разтвор на натриев хлорид. Вторият етап се състои от приготвяне на 5% суспензия от промити еритроцити и комбиниране на една капка еритроцити с една капка антиглобулинов серум върху бяла (порцеланова) плака с намокрена повърхност. Резултатите се отчитат до 10 минути. Изключение фалшиви положителни резултатипроизведени чрез извършване на контролни изследвания. Използване изотоничен разтворнатриев хлорид вместо антиглобулинов серум не трябва да се придружава от аглутинация на червените кръвни клетки. Извършване на непряка K. r. срещу еритроцити с известен изоантигенен фенотип позволява да се установи специфичността на антителата. Например, изследване на серума на пациента с червени кръвни клетки 0(I), CDE, Kk, Fya; 0(1), CDe, Kk, Fuа; 0(I), cDe, Kk, Fya; 0(I), cDE, Kk, Fya; 0(I), cde, kk, Fya показаха положителен резултат с кръвната проба в 1-ви и 4-ти случай; други кръвни проби (случаи 2, 3, 5) показват отрицателен резултат. Серумът съдържа анти-Е антитела. С помощта на индиректни K. r. могат да се открият непълни антитела срещу антигени: C, D, E, c, e; К, к; Fya, Fyb; Леа, Леб; Jka, Jkb и др. (виж Кръвни групи).

Директна реакция на Кумбс

Директната реакция на Кумбс по своята техника съответства на втория етап на непряка К. Р.: червените кръвни клетки на пациента (5% суспензия), промити три пъти с изотоничен разтвор на натриев хлорид, се комбинират с антиглобулинов серум. Директен К.р. извършва се, когато има причина да се смята, че червените кръвни клетки на изследвания пациент вече са сенсибилизирани с антитела in vivo. Положителна права линия K. r. служи като диагностичен знак за хемолитична болест на новородени, причинена от сенсибилизация на тялото на жената към фетални антигени и проникване на антитела през плацентата в тялото на детето, както и с придобити хемолитична анемия.

Отзад последните годиниК.р. значително подобрена. С негова помощ е възможно не само да се установи наличието на антитела върху червените кръвни клетки, но и да се установи класът на имуноглобулините (вижте). За да направите това, използвайте серум срещу определени класове имуноглобулини: IgG, IgM, IgA. Изоимунните антитела срещу Rhesus, Kell антигените, Duffy антигените и други антигени, както и топлите автоимунни антитела обикновено се класифицират като IgG. Студените автоимунни антитела, както и изоимунните антитела срещу Le и някои други антигени, като правило, принадлежат към IgM. Само редки автоимунни антитела са от IgA природа (виж Автоантитела).

Библиография: Dygin V.P. Автоимунни заболявания в клиниката по вътрешни болести, L., 1970, библиогр.; Касиер-и до И. А. и Алексеев Г. А. Клинична хематология, М., 1970; Косяков П. Н. Човешки изо-антигени и изо-антитела в нормални и патологични състояния, М., 1974, библиогр.; V o i v i n P. e. а. Les anemies hemolytiques, p. 93, С., 1971, библиогр.; Клинични аспекти на имунологията, изд. от P. G. H. Geli a. о., Оксфорд, 1975 г.; Coombs R. R. A., M ou g a n t A. E. a. Race R. R. In-vivo изосенсибилизация на червени кръвни клетки при бебета с хемолитична болест, Lancet, v. 1, стр. 264, 1946 г.

Тест на Кумбс– анализ за откриване на антитела, прикрепени към повърхност или разтворени в плазма. Използва се за откриване на имунизация и антитела към червените кръвни клетки. Второто име е антиглобулинов тест. Тя може да бъде пряка или косвена.

При директен антиглобулинов тестоткрива антитела, фиксирани на повърхността на червените кръвни клетки. Провежда се при съмнение за други автоимунни заболявания, след прием на лекарства (метилдопа, пеницилин, хинин) и др.

Червените кръвни клетки са сенсибилизирани in vivo - антителата вече са здраво прикрепени към тях и добавянето на антиглобулинов серум (anti-IgG) кара сенсибилизираните клетки да се слепват, което се вижда с просто око.

Индиректен тест на Кумбсоткрива антиеритроцитни антитела в кръвната плазма, извършва се преди и по време на кръвопреливане.

Антиеритроцитните антитела са вид автоантитела, т.е. антитела срещу вашите собствени тъкани. Автоантитела възникват по време на патологична реактивност имунна системаза някои лекарства, например високи дозипеницилин.

Червените кръвни клетки на повърхността си съдържат различни химични структури(гликолипиди, захариди, гликопротеини и протеини), в медицината наричани антигени. Човек наследява от родителите си специфична карта на антигените на всяка червена кръвна клетка.

Антигените се обединяват в групи и след това кръвта се разделя на няколко групи - по системата AB0, Rh, Kell, Lewis, Kidd, Duffy. Най-известните и значими в работата на лекаря са AB0 и Rh факторът (Rh).

система АВ0

Rh статусът на дадено лице се определя от наличието на тези антигени. Особено важен антиген на еритроцитите е антиген D. Ако той присъства, тогава те говорят за Rh положителна кръв RhD, а ако го няма – о Rh отрицателен Rhd.

Ако съответното антитяло се прикрепи към еритроцитните антигени, еритроцитите се разрушават - хемолиза.

Показания

Основната индикация за директенантиглобулинов тест- подозрение за хемолитична анемия. Най-често се извършва при първична автоимунна хемолитична анемия, хемолиза при ревматични, туморни, инфекциозни заболявания, лекарствено индуцирана хемолиза.

Ако анемията се появи няколко дни или месеци след кръвопреливане или при продължителна жълтеница при новородено, се прави и директен тест на Coombs.

Непрякпровежда се антиглобулинов тестпреди кръвопреливане и по време на бременност на Rh-отрицателна жена.

Автоимунна хемолитична анемия

Автоимунна хемолитична анемия (първична)– класическо автоимунно заболяване с неизвестни причини. Взаимодействието в рамките на имунната система е нарушено, което води до възприемане на собствените червени кръвни клетки като чужди. Антителата се синтезират в лимфните възли IgG клас(реагират при t 37°C) и/или IgM (при t 40°C), които, прикрепени към повърхността на еритроцита, задействат редица ензими (системата на комплемента) и „перфорират“ стената на еритроцита. , което води до неговото разрушаване – хемолиза.

Първите симптоми са причинени както от разрушаването на червените кръвни клетки, така и от намаляването на хемоглобина. Между тях:

• умора, обща слабост, раздразнителност
• диспнея
• болка в корема и гърдите, гадене
• тъмен цвят на урината
• болка в гърба
• иктерично обезцветяване на кожата и лигавиците
• намаляване на броя на червените кръвни клетки и

Директен положителен резултат Тестове на Кумбс 100% потвърждава диагнозата автоимунна хемолитична анемия, доказвайки нейния автоимунен произход. В същото време отрицателният резултат не прави възможно премахването на диагнозата.

Вторична хемолитична анемия

Вторична автоимунна хемолитична анемия и положителен тест на Coombs могат да възникнат при следните заболявания:

• Синдром на Евънс
• инфекция на пневмония

Положителният антиглобулинов тест за тези заболявания е един от симптомите, а не критерий за диагноза.

Хемолитична болест на новороденото

причина хемолитична болест на новородени -несъвместимост на кръвната група на майката и плода, в повечето случаи според системата Rh, в единични случаи - според системата AB0, казуистично - според други антигени.

Rh конфликтът се развива, ако плодът на Rh-отрицателна жена наследи Rh-положителна кръв от бащата.

Заболяването се развива при новородено само ако майката вече е развила антитела към съответните антигени, което се случва след предишни бременности, аборти и несъвместими кръвопреливания. Повечето обща причиназадействане на синтеза на антитела към антигени на еритроцитната мембрана - раждане (фето-майчино кървене). Първото раждане обикновено протича без усложнения, но следващите са изпълнени с хемолитична болест на новороденото в първите дни след раждането.

Симптоми на хемолитична болест на новороденото:

• пожълтяване на кожата
• , и лигавиците
• увеличен черен дроб и далак
• проблеми с дишането
• подуване на цялото тяло
• възбуждане и постепенно потискане на централната нервна система

Анемия след кръвопреливане

Индиректен тест на Кумбсизвършва се преди кръвопреливане за оценка на съвместимостта и директен тест на Coombs - след него, ако се подозира посттрансфузионна хемолиза, т.е. при наличие на симптоми като треска, поливане (прочетете по-долу). Целта на анализа е да се идентифицират антитела към трансфузирани червени кръвни клетки, които са се свързали с червените кръвни клетки на реципиента и са причина за посттрансфузионна хемолиза, както и преждевременно отстраняване на донорни червени кръвни клетки от кръвообращението на реципиента (този, който е получил кръвта).

Симптоми:

• повишаване на телесната температура
• кожен обрив
• болка в гърба
• червен
• гадене
• световъртеж

Декодиране

Струва си да припомним, че основните правила за дешифриране на директни и индиректни антиглобулинови тестове са еднакви. Единствената разлика е местоположението на антителата – в кръвта или върху червените кръвни клетки.

• Ако директният тест на Coombs е отрицателен– това означава, че антитялото не „седи“ върху червените кръвни клетки и трябва да се търси допълнително причината за симптомите и да се направи индиректен тест на Кумбс
• ако се установи положителен резултат от теста на Coombs след кръвопреливане, инфекции, лекарства - положителността продължава до 3 месеца (животът на червените кръвни клетки е 120 дни - 3 месеца)
• положителен резултат от антиглобулинов тест с автоимунно заболяванепродължава месеци и дори години

норма

• директен тест на Coombs - отрицателен
• индиректен тест на Кумбс - отрицателен

Качествено положителният резултат се измерва в броя на плюсовете от едно до четири (+, ++, +++, ++++), а количествено в цифров вид - 1:16, 1:256 и т.н.

да Вашият лекар определено трябва да знае, че сте получили кръвопреливане, тъй като това влияе върху правилното тълкуване на резултатите от теста сега. При получаване на чужда (макар и многократно изследвана) кръв винаги има възможност тялото ви да развие антитела срещу прелятата кръв. Именно тези антитела ще имат отрицателно въздействие върху здравето. За последващи кръвопреливания лекарят трябва да знае, че вече сте получили трансфузии, което означава, че е имало време за синтез на антитела. За бременните жени тази информация е още по-актуална.

3. Ако има несъответствие в Rh фактора между майката и детето, всички деца ще бъдат ли болни?

Зависи от това дали детето е Rh положителен или отрицателен (RhD). Носителите на кръвни групи I, II, III и IV могат да бъдат Rh положителни или отрицателни. В ситуация, когато майката е Rh отрицателна, а детето е Rh положително, антителата ще бъдат произведени още с първата бременност, но едва след първото раждане (или прекъсване на бременността) ще има пряк контакт между кръвта на майката и детето. Хемолитичният ефект на антителата ще се реализира само по време на второто и следващо раждане, което ще доведе до хемолитична болест на новороденото.

Всяка жена с отрицателен Rh фактортрябва да бъдат внимателно изследвани по време на бременност и след раждане превантивно лечениеза предотвратяване на появата на антитела и допълнителни усложнения.

4. По време на бременност, необходимо ли е да знам кръвната група на съпруга ми, преди да направя тест на Кумбс?

Трябва не само да знаете, но и да проверите кръвната група на биологичния баща на детето по време на бременност.

Данни

• предложен за първи път в Кеймбридж през 1945 г
• праг на чувствителност - най-малко 300 фиксирани молекули антитела върху една червена кръвна клетка
• броят на антителата, предизвикващи хемолиза - индивидуално за всеки човек (от 16-30 до 300)
• динамика на др лабораторни параметрихемолитичната анемия (хемоглобин, билирубин, ретикулоцити) може да се нормализира и тестът на Coombs ще остане на същото ниво

Тестът на Coombs беше последно модифициран: 16 март 2018 г. от Мария Бодян

Тестът на Coombs е специфичен лабораторен тест, който открива антитела, разположени в или на повърхността на червени кръвни клетки. Тази процедурави позволява да диагностицирате имунната система, включително при новородени, както и да идентифицирате реакции на хемолитична трансфузия. Тестът на Кумбс се използва активно в съдебна медицинаи научна генетика за определяне на еритроцитни антигени. Спазването на всички правила за извършване на такъв анализ ви позволява да получите най-надеждния резултат.

Цел на антиглобулиновия тест

Директният тест на Coombs ви позволява да откриете анти-еритроцитни антитела, които са фиксирани върху червените кръвни клетки. Положителната реакция в такова изследване показва развитието на автоимунно заболяване.Трябва да се отбележи, че отрицателният резултат не изключва наличието на антитела, тъй като антителата често се намират в свободна форма, тоест нямат връзка с червената кръв клетки. В такива случаи е препоръчително да се проведе индиректен тест на Кумбс, който ще позволи определянето на автономни вещества в

Как се извършва анализът?

абор венозна кръвпациентът се провежда сутрин на празен стомах, въпреки факта, че не са открити значими фактори, влияещи върху крайния резултат от такъв тест. Разрешава се съхраняването на взетия материал при температура от 2 до 8 °C за не повече от седем дни. С цел показателите това учениебяха възможно най-точни цяла кръвтрябва да бъдат доставени в лабораторията в рамките на първите два часа. В идеалния случай тестът на Coombs трябва да покаже отрицателен резултат, което показва липсата на хемолитични промени в тялото.

Декодиране на крайните показатели

Тестът на Coombs е доста трудоемък изследователски метод, който изисква внимателно и прецизно изпълнение. При използването на такъв тест може да има някои трудности, свързани с неправилно тълкуване на крайните резултати поради слаби прояви положителни реакции. Трябва да се отбележи, че ненадеждността на анализа - а именно положителен тест на Coombs - може да бъде следствие от неефективно измиване на червените кръвни клетки, контакт с мастни
повърхност, както и неутрализиране на антиглобулинови реагенти по компоненти

серум. Друг недостатък на този метод на изследване е нестабилността на взетия материал, чието съхранение има определени особености.

Фалшиво отрицателен резултат може да бъде причинен от прекомерно разклащане на суспензията от червени кръвни клетки по време на ресуспендирането. Грешните резултати могат също да се дължат на наличието на замърсители на антикомплементарни антитела, които се адсорбират по време на инкубацията върху повърхността на изследваните червени кръвни клетки, което води до появата на положителен резултат. Ако тестовите проби са старателно измити и условията на реакцията са контролирани, тези недостатъци могат лесно да бъдат отстранени, което ще увеличи шансовете за получаване на най-надеждните стойности на теста на Coombs.