Kas yra tandeminė masės spektrometrija. Vaikų epilepsija – apie TMS genetinę analizę

Remiantis apžvalga, paskelbta Clinical Biochemist Reviews, per pastaruosius 10–12 metų labai išaugo didelio efektyvumo skysčių chromatografijos, sujungtos su tandeminės masės spektrometrijos (HPLC-MS/MS), naudojimas klinikinėse laboratorijose. Autoriai pažymi, kad HPLC-MS/MS analizės specifiškumas yra žymiai pranašesnis už imunologinius metodus ir klasikinę didelio efektyvumo skysčių chromatografiją (HPLC), skirtą mažos molekulinės masės molekulių analizei, ir turi žymiai didesnį pralaidumą nei dujų chromatografijos-masių spektrometrija (GC). -MS). Šio metodo populiarumas atliekant įprastines klinikines analizes šiuo metu paaiškinamas unikaliomis metodo galimybėmis.

Pagrindiniai HPLC-MS/MS metodo pranašumai yra šie:
• Galimybė atlikti tikslią kiekybinę mažų molekulių analizę;
• Vienalaikė kelių tikslinių junginių analizė;
• Unikalus specifiškumas;
• Didelis analizės greitis.

Pastaraisiais metais daug dėmesio skiriama analizės laikui ir dėl to laboratorijos našumo didinimui. Žymiai sutrumpinti analizės laiką galima naudojant trumpas analizės kolonėles HPLC/MS/MS, tuo pačiu žymiai padidinant analizės specifiškumą. Atmosferos slėgio jonizacijos (API), tandeminio trigubo kvadrupolio masės spektrometro ir pažangios didelio efektyvumo skysčių chromatografijos, taip pat susijusių mėginių paruošimo metodų, naudojimas atnešė HPLC-MS/MS į šiuolaikinių klinikinių tyrimų analizės metodų priešakį.

Pagrindinės HPLC/MS/MS taikymo sritys klinikinėje medicinoje:
• Išsamus steroidų plokščių, purinų ir pirimidinų bei kitų junginių metabolizmo profilis,
  naujagimių patikra dėl įgimtų medžiagų apykaitos klaidų (vieno tyrimo metu nustatomos kelios dešimtys ligų);
• Vaistų – imunosupresantų, perikonvulsantų, antiretrovirusinių, antikoaguliantų ir bet kokių kitų – terapinis stebėjimas, neatsižvelgiant į tai, ar yra gamintojo rinkinių. Nereikia pirkti brangių rinkinių kiekvienai medžiagai - galite sukurti savo metodus;
• Klinikinė toksikologija – daugiau nei 500 narkotinių junginių ir jų metabolitų analizė vienoje analizėje, be patvirtinančios analizės
  proteomika ir metabolomika.

Be to, HPLC-MSMS naudojamas šlapimo oligosacharidų, sulfatido, ilgos grandinės riebalų rūgščių, ilgos grandinės tulžies rūgščių, metilmalono rūgšties, porfirijos tyrimams ir pacientų, turinčių purino ir pirimidino apykaitos sutrikimų, atrankai.

Skysčių chromatografijos taikymo pavyzdžiai
kartu su tandemine masės spektrometrija klinikinėse analizėse.

Naujagimio patikra: Pirmasis plačiai paplitęs HPLC-MS/MS panaudojimo klinikinėje diagnostikoje pavyzdys buvo naujagimių įgimtų medžiagų apykaitos klaidų patikra. Šiuo metu išsivysčiusiose šalyse tai yra įprastas metodas ir apima daugiau nei 30 skirtingų ligų, įskaitant acetemiją, aminoacidopatiją ir riebalų rūgščių oksidacijos defektus. Ypač verta atkreipti dėmesį į apsigimimų tyrimus, kurie gali sukelti rimtų problemų, jei nebus nedelsiant sprendžiami (pavyzdžiui, padidėjusi širdis ar kepenys arba smegenų patinimas). HPLC-MS/MS naudojimo naujagimių atrankai pranašumas yra galimybė vienu metu greitai, nebrangiai ir labai specifiniu būdu analizuoti visas aminorūgštis ir acilkarnitinus.

Terapinių vaistų stebėjimas: Imunosupresinio vaisto sirolimuzo (rapamicino) sukūrimas ir įvedimas siekiant išvengti organų atmetimo po transplantacijos buvo vienas iš pagrindinių HPLC-MS/MS įvedimo į klinikines laboratorijas jėgų. Šiuolaikinis HPLC-MS/MS metodas leidžia vienu metu nustatyti takrolimuzo, sirolimuzo, ciklosporino, everolimuzo ir mikofeno rūgšties kiekį.

HPLC-MS/MS taip pat naudojamas tiriant citotoksinius, antiretrovirusinius vaistus, triciklius antidepresantus, prieštraukulinius vaistus ir kitus vaistus, kuriems reikalinga individuali dozė.

HPLC-MSMS metodas leidžia atskirti ir kiekybiškai įvertinti varfarino R- ir S-enantiomerus, kai koncentracija yra 0,1-500 ng/ml.

Narkotikai ir skausmą malšinantys vaistai: HPLC-MS/MS yra plačiai naudojamas šių junginių analizei dėl lengvo mėginio paruošimo ir trumpo analizės laiko. Šiuo metu šis metodas naudojamas klinikinėse laboratorijose, siekiant nustatyti, ar nėra įvairių vaistų. Unikalus metodo specifiškumas ir jautrumas leidžia vienu metu išanalizuoti daugiau nei 500 įvairių klasių junginių viename mėginyje su minimaliu mėginio paruošimu. Taigi, atliekant šlapimo analizę, pakanka paprasto mėginio praskiedimo 50-100 kartų. Analizuojant plaukus, vietoj 100–200 plaukelių pakanka vieno plauko, kad būtų galima patikimai nustatyti narkotikų vartojimo faktus.

Endokrinologija ir steroidų analizė: HPLC-MS/MS plačiai naudojamas daugelyje endokrinologijos laboratorijų steroidų – testosterono, kortizolio, aldesterono, progesterono, estriolio ir daugelio kitų – analizei.

Vis daugiau laboratorijų pradeda naudoti HPLC-MS/MS vitamino D3 ir D2 kiekiui kraujyje nustatyti.

I. Steroidų nustatymas (steroidų profilis).

Ligoninių ir klinikų laboratorijos dabar turi galimybę vienu metu atlikti kelių steroidų nustatymą naudojant HPLC/MS/MS. Šiuo atveju nereikia didelio mėginio tūrio, o tai ypač svarbu analizuojant vaikų mėginius.

Atvejai, kai patartina nustatyti kelis (profiliuojančius) steroidus:
• Įgimta antinksčių hiperplazija (CAH) yra įgimtas steroidų biosintezės defektas. Tai paveldima ligų grupė, kurią sukelia netinkamas antinksčių žievės fermentų aktyvumas, dėl kurio sumažėja kortizolio gamyba. Norint patikimai diagnozuoti NAS, rekomenduojama išmatuoti kortizolio, androstenediono ir 17-hidroksiprogesterono kiekį. HPLC/MS/MS leidžia tiksliai nustatyti visų trijų steroidų kiekį vienoje analizėje su 100 % patikimumu.
• Įprasta naujagimių patikra, naudojant imunologinius tyrimus, pasižymi dideliu teigiamų ir klaidingai neigiamų rezultatų dažniu. HPLC/MS/MS metodu ne tik kortizolio, bet ir aldosterono bei 11-deoksikortizolio nustatymas leidžia atskirti pirminį nuo antrinio antinksčių nepakankamumo.
• HPLC/MS/MS leidžia nustatyti steroidus sergant prostatitu ir lėtiniu dubens skausmo sindromu.
• HPLC-MS/MS gali nustatyti steroidų profilius ir nustatyti su antinksčių žieve susijusio ankstyvo brendimo mažiems vaikams priežastis. Nustatyta, kad šių vaikų testosterono, androstenediono, dehidroepiandrosterono (DHEA) ir jo sulfato koncentracija buvo šiek tiek didesnė nei vyresnių kontrolinių vaikų.
• Aktyvių rūkančiųjų, pasyvių rūkančiųjų ir nerūkančiųjų serume analizuojamas 15 steroidinių hormonų ir skydliaukės hormonų, siekiant ištirti ryšį tarp paciento rūkymo ir hormonų koncentracijos.
• HPLC/MS/MS naudojamas kai kurių moteriškų steroidinių hormonų šlapime profiliavimui.
• HPLC/MS/MS buvo naudojamas neuroaktyvių hormonų koncentracijoms įvertinti diabetinės neuropatijos prevencijai.

II. Skydliaukės hormonų nustatymas

Įprasti skydliaukės hormonų nustatymo metodai paprastai remiasi radioimuniniais tyrimais, kurie yra brangūs ir nustato tik T3 ir T4, o tai gali apriboti galimybę nustatyti ir visiškai reguliuoti skydliaukės funkciją.

• Šiuo metu, naudojant HPLC-MSMS, vienu metu atliekama penkių skydliaukės hormonų analizė serumo mėginiuose, įskaitant tiroksiną (T4), 3,3′,5-trijodtironiną (T3), 3,3′,5′- (rT3). , 3 ,3'-dijodtironinas (3,3'-T2) ir 3,5-dijodtironinas (3,5-T2) koncentracijos intervale 1 -500 ng/ml.
• HPLC/MS/MS metodas taip pat naudojamas hormonų sudėties analizei pacientams, kuriems buvo atlikta skydliaukės pašalinimas. Po operacijos nustatomi tiroksino (T4), trijodtironino (T3), laisvojo T4 ir skydliaukę stimuliuojančio hormono (TSH) koncentracijos lygiai. Nustatyta, kad HPLC/MS/MS yra puikus būdas nustatyti ryšį tarp TSH ir skydliaukės hormonų koncentracijos.
• Tiroksino (T4) kiekiui žmogaus seilėse ir serume nustatyti buvo naudojamas HPLC/MS/MS metodas. Metodas pasižymi dideliu atkuriamumu, tikslumu ir 25 pg/ml aptikimo riba. Tyrimai parodė, kad tarp eutiroidinių pacientų ir pacientų, sergančių Greivso liga, T4 koncentracija seilėse yra diagnostinė.

HPLC/MS/MS metodas dabar pasižymi jautrumu, specifiškumu ir tikslumu, reikalingu patikimam visų steroidų kiekiui biologiniuose skysčiuose nustatyti ir taip pagerina diagnostikos galimybes, ypač steroidų rinkinių nustatymo atveju.

III. 25-hidroksivitamino D nustatymas HPLC/MS/MS metodu

25-hidroksi vitaminas D (25OD) yra pagrindinė cirkuliuojanti vitamino D forma ir jo aktyvios formos pirmtakas. (1,25-dihidroksivitaminas D). Dėl ilgo pusinės eliminacijos periodo 25OD nustatymas yra svarbus nustatant vitamino D būklę paciento organizme. Vitaminas D yra dviejų formų: vitaminas D3 (cholekalciferolis) ir vitaminas D2 (ergokalciferolis). Abi formos metabolizuojamos į atitinkamas 25OD formas. Diagnozei didelę reikšmę turi analitinių metodų, kuriais galima labai tiksliai nustatyti abi vitamino formas ir stebėti ligonius, kuriems trūksta vitamino D, prieinamumas. Iki šiol taikytais metodais nebuvo galimybės atskirai nustatyti vitamino D2 ir D3. Be to, esant didelei vitamino D2 koncentracijai, aptinkamas D3 kiekis yra nepakankamai įvertintas. Kitas trūkumas yra radioaktyviųjų izotopų naudojimas. HPLC/MS/MS metodo naudojimas leido ne tik išvengti radioaktyviųjų izotopų naudojimo, bet ir atlikti atskirą abiejų aktyvių vitamino formų nustatymą.

Metodas taikomas šiems pacientams:
1. Jei įtariate, kad organizme yra mažas vitamino D kiekis;
2. Jei įtariamas nepaaiškinamas toksiškumas;
3. Tiriant pacientus, kurie gydomi dėl mažo vitamino D kiekio;
4. Naudojant HPLC/MS/MS, stebint pacientus buvo galima atskirai nustatyti abi formas.

IV. Imunosupresantų nustatymas HPLC/MS/MS metodu

Po organų transplantacijos imunosupresinius vaistus reikia vartoti visą gyvenimą, kad būtų išvengta atmetimo. Labai siauro terapinio diapazono ir didelio toksiškumo imunosupresantai reikalauja individualaus dozavimo, kad būtų pasiektas didžiausias poveikis. Todėl pagrindinių imunosupresinių vaistų – ciklosporino A, takrolimuzo, sirolimuzo ir everolimuzo – stebėjimas yra gyvybiškai svarbus, norint koreguoti vaistų dozę kiekvienam pacientui, atsižvelgiant į vaisto koncentraciją kraujyje.

Imunologiniai tyrimai vis dar naudojami šiems vaistams stebėti, tačiau šie metodai yra brangūs ir turi ribotą specifiškumą, tikslumą ir atkuriamumą. Remiantis imunologiniais metodais gautais rezultatais, yra atvejų, kai pacientai miršta nuo neteisingo imunosupresantų dozavimo. Šiuo metu klinikinėse laboratorijose imunologinius tyrimus keičia HPLC/MS/MS. Taigi, Miuncheno universiteto klinikoje, naudojant HPLC/MS/MS sistemą, kasdien analizuojama apie 70 mėginių, siekiant nustatyti sirolimuzo ir ciklosporino A kiekį. Visą mėginių paruošimą ir instrumentų kontrolę atlieka vienas darbuotojas. Laboratorija taip pat pereina prie takrolimuzo tyrimo šiuo metodu.

• Aprašytas HPLC/MS/MS naudojimas įprastiniam takrolimuzo, sirolimuzo, askomicino, demetiksisirolimuzo, ciklosporino A ir ciklosporino G kiekiui kraujyje nustatyti vienu metu. Pagal koncentraciją nustatytas diapazonas yra 1,0 - 80,0 ng/ml. Ciklosporinui 25 - 2000 ng/ml. Per metus laboratorija ištyrė daugiau nei 50 000 mėginių.
• Kadangi nustatyta, kad takrolimuzo ir sirolimuzo vartojimas vienu metu turi teigiamą gydomąjį poveikį, buvo sukurtas paprastas ir efektyvus HPLC/MS/MS metodas, skirtas atskiram jų nustatymui kraujyje klinikinei analizei. Vieno mėginio analizė trunka 2,5 minutės, o visos analizės kreivės tikslumas svyruoja nuo 2,46% iki 7,04% takrolimuzo ir 5,22% - 8,30% sirolimuzo. Apatinė takrolimuzo aptikimo riba yra 0,52 ng/ml, sirolimuzo – 0,47 ng/ml.

V. Homocisteino nustatymas HPLC/MS/MS metodu

Homocisteinas domisi širdies ir kraujagyslių ligomis (tromboembolija, širdies ligomis, ateroskleroze) ir kitomis klinikinėmis ligomis (depresija, Alzheimerio liga, osteoporoze, nėštumo komplikacijomis ir kt.). Dabartiniai homocisteino analizės metodai, įskaitant imunologinius tyrimus, yra brangūs. Greitas HPLC/MS/MS metodas homocisteino analizei buvo sukurtas įprastiniam klinikiniam naudojimui analizuojant didelį mėginių skaičių. Jonizacija buvo atlikta elektropurškimo metodu. Metodas yra atkuriamas, labai specifinis ir tikslus. Metodo privalumai taip pat yra maža reagentų kaina ir paprastas mėginio paruošimas. Per dieną galima išanalizuoti 500 ir daugiau mėginių.

Išvada

Reikėtų pažymėti, kad nors dabar naudojami žymiai patobulinti imunologinio tyrimo metodai, dėl esminių techninių apribojimų šis metodas niekada nebus tikslios medžiagos tikslumo ir specifiškumo, prilygstančio HPLC-MSMS, ypač esant metabolitams. Tai ne tik lemia mažą ELISA metodo tikslumą ir didelį klaidingai teigiamų bei klaidingai neigiamų rezultatų procentą, bet ir neleidžia palyginti skirtinguose klinikiniuose skyriuose gautų rezultatų ELISA metodu. HPLC-MS/MS naudojimas pašalina šį trūkumą ir leidžia labai specifinę, tikslią ir greitą daugelio mėginių analizę, labai patikimai esant metabolitams ir netrukdant kartu esančioms bei endogeninėms medžiagoms, esančioms plazmoje ir kraujyje. pacientų.

Nepaisant akivaizdžiai didelių prietaisų komplekso kainų, kaip rodo pasaulinė praktika, tinkamai eksploatuojant šis kompleksas atsiperka per 1-2 metus. Visų pirma tai atsitinka dėl mažos vienos analizės kainos, nes vienu metu atliekama dešimčių ir šimtų junginių analizė, ir dėl to, kad nereikia įsigyti brangių diagnostikos rinkinių. Be to, laboratorija turi galimybę savarankiškai sukurti bet kokius būtinus analizės metodus ir nepriklausyti nuo rinkinio gamintojo.

Tinkamos įrangos konfigūracijos pasirinkimas

Yra daugybė skirtingų masės spektrometrijos metodų ir masių spektrometrų tipų, skirtų įvairioms problemoms spręsti – nuo ​​sudėtingų baltymų makromolekulių, sveriančių šimtus tūkstančių daltonų, struktūrinio identifikavimo iki įprastinės didelio našumo kiekybinės mažų molekulių analizės.

Norint sėkmingai išspręsti problemą, viena iš pagrindinių sąlygų yra tinkamo tipo įrangos pasirinkimas. Nėra universalaus įrenginio, kuris leistų išspręsti visą spektrą analitinių problemų. Taigi prietaisas, skirtas mikroorganizmų identifikavimo problemai išspręsti, nėra pajėgus atlikti kiekybinės mažų molekulių analizės. Ir atvirkščiai. Faktas yra tas, kad, nepaisant bendro pavadinimo, tai yra visiškai skirtingi įrenginiai, veikiantys skirtingais fiziniais principais. Pirmuoju atveju tai yra skrydžio laiko masės spektrometras su lazerio jonizacijos šaltiniu - MALDI-TOF, o antruoju - trigubu kvadrupoliu su elektropurškimo jonizacija - HPLC-MSMS.

Antras svarbiausias parametras yra teisingos sistemos konfigūracijos pasirinkimas. Yra keletas pagrindinių masių spektrometrijos įrangos gamintojų. Kiekvieno gamintojo įrenginiai turi ne tik savo stipriąsias, bet ir silpnąsias puses, apie kurias dažniausiai mieliau nutylima. Kiekvienas gamintojas gamina savo prietaisų liniją. Vieno analitinio komplekso kaina svyruoja nuo 100 000 iki 1 000 000 ar daugiau dolerių. Pasirinkus optimalų gamintoją ir teisingą įrangos konfigūraciją, ne tik sutaupysite nemažus finansinius išteklius, bet ir efektyviau išspręsite užduotį. Deja, yra daug pavyzdžių, kai laboratorinė įranga buvo atlikta neatsižvelgiant į šiuos veiksnius. Rezultatas – nenaudojama įranga ir iššvaistyti pinigai.

Trečias veiksnys, lemiantis sėkmingą laboratorijos veiklą – personalas. Masių spektrometrų veikimui reikalingi aukštos kvalifikacijos darbuotojai. Deja, ne vienas Rusijos universitetas turi šiuolaikinės praktinės masių spektrometrijos kursą, ypač kai tai susiję su klinikiniais taikymais, ir kiekvienoje laboratorijoje personalo mokymo uždaviniai turi būti sprendžiami savarankiškai. Natūralu, kad 2-3 dienų įvadinių mokymų, kuriuos gamintojas veda po įrangos paleidimo, visiškai nepakanka norint suprasti metodo pagrindus ir įgyti įrenginio valdymo įgūdžių.

Ketvirtas veiksnys – paruoštų analizės metodų trūkumas. Kiekviena laboratorija turi savo prioritetines užduotis, kurioms atlikti būtina sukurti savo metodus. Tai gali padaryti asmuo, turintis ne mažesnę kaip 2-3 metų įrenginio naudojimo patirtį. Gamintojai kartais pateikia vieną ar du bendruosius rekomendacinio pobūdžio metodus, bet nepritaiko jų konkrečioms laboratorijos užduotims.

IN BioPharmExpert LLC Pas mus dirba ilgametę patirtį turintys specialistai, dirbantys su įvairių tipų masės spektrometrais, taip pat kuriantys metodus ir atliekantys didelio našumo analizes. Todėl teikiame šias paslaugas:

1. Optimalios įrenginio konfigūracijos pasirinkimas konkrečioms kliento užduotims atlikti.
2. Įrangos pirkimas, tiekimas ir paleidimas iš pirmaujančių tandeminių masės spektrometrų gamintojų Žingsnis po žingsnio personalo mokymas per metus nuo įrangos paleidimo datos.
3. Paruoštų metodų ir duomenų bazių rinkinys pagrindinėms klinikinėms problemoms spręsti.
4. Analizės metodų kūrimas ir specifinių kliento problemų sprendimas jo laboratorijoje, įtraukiant jo darbuotojus.
5. Metodinė pagalba visuose darbo etapuose.

[06-225 ] Aminorūgščių kraujo tyrimas (32 rodikliai)

5645 rub.

Įsakymas

Aminorūgštys yra svarbios organinės medžiagos, kurių struktūroje yra karboksilo ir aminų grupių. Išsamus tyrimas, nustatantis aminorūgščių ir jų darinių kiekį kraujyje, leidžia nustatyti įgimtus ir įgytus aminorūgščių apykaitos sutrikimus.

* Studijos sudėtis:

1. Alaninas (ALA)
2. Argininas (ARG)
3. Asparto rūgštis (ASP)
4. Citrulinas (CIT)
5. Glutamo rūgštis (GLU)
6. Glicinas (GLY)
7. Metioninas (MET)
8. Ornitinas (ORN)
9. Fenilalaninas (PHE)
10. Tirozinas (TYR)
11. Valinas (VAL)
12. Leucinas (LEU)
13. Izoleucinas (ILEU)
14. Hidroksiprolinas (HPRO)
15. Serinas (SER)
16. Asparaginas (ASN)
17. Glutaminas (GLN)
18. Beta-alaninas (BALA)
19. Taurinas (TAU)
20. Histidinas (HIS)
21. Treoninas (THRE)
22. 1-metilhistidinas (1MHIS)
23. 3-metilhistidinas (3MHIS)
24. Alfa-aminosviesto rūgštis (AABA)
25. Prolinas (PRO)
26. Cistationinas (CYST)
27. Lizinas (LYS)
28. Cistinas (CYS)
29. Cisteino rūgštis (CYSA)

Sinonimai rusų kalba

Atranka dėl aminoacidopatijos; aminorūgščių profilis.

SinonimaiAnglų

Amino rūgščių profilis, plazma.

Metodastyrimai

Aukštos kokybės skysčių chromatografija.

Kokia biomedžiaga gali būti naudojama tyrimams?

Veninis kraujas.

Kaip tinkamai pasiruošti tyrimams?

• 24 valandas prieš tyrimą pašalinkite alkoholį iš dietos.
• Nevalgykite 8 valandas prieš tyrimą, galite gerti švarų negazuotą vandenį.
• Visiškai venkite vartoti vaistus 24 valandas prieš tyrimą (pasitarę su gydytoju).
• 30 minučių prieš tyrimą venkite fizinio ir emocinio streso.
• Nerūkykite 30 minučių prieš tyrimą.

Bendra informacija apie tyrimą

Aminorūgštys yra organinės medžiagos, turinčios karboksilo ir aminų grupių. Yra žinoma apie 100 aminorūgščių, tačiau baltymų sintezėje dalyvauja tik 20. Šios aminorūgštys vadinamos „proteinogeninėmis“ (standartinėmis) ir pagal sintezės galimybę organizme skirstomos į pakeičiamąsias ir nepakeičiamąsias. Nepakeičiamos aminorūgštys yra argininas, valinas, histidinas, izoleucinas, leucinas, lizinas, metioninas, treoninas, triptofanas, fenilalaninas. Neesminės aminorūgštys yra alaninas, asparaginas, aspartatas, glicinas, glutamatas, glutaminas, prolinas, serinas, tirozinas, cisteinas. Proteinogeninės ir nestandartinės aminorūgštys, jų metabolitai dalyvauja įvairiuose medžiagų apykaitos procesuose organizme. Fermentų defektas įvairiuose medžiagų transformacijos etapuose gali sukelti aminorūgščių ir jų virsmo produktų kaupimąsi ir neigiamai paveikti organizmo būklę.

Aminorūgščių apykaitos sutrikimai gali būti pirminiai (įgimti) arba antriniai (įgyti). Pirminės aminoacidopatijos dažniausiai yra paveldimos autosominiu būdu recesyviai arba susietos su X ir pasireiškia ankstyvoje vaikystėje. Ligos išsivysto dėl genetiškai nulemto fermentų ir/ar transportinių baltymų trūkumo, susijusio su tam tikrų aminorūgščių metabolizmu. Literatūroje aprašyta daugiau nei 30 aminoacidopatijų variantų. Klinikinės apraiškos gali būti įvairios: nuo lengvų gerybinių sutrikimų iki sunkios metabolinės acidozės ar alkalozės, vėmimo, protinio atsilikimo ir augimo sulėtėjimo, vangumo, komos, staigios naujagimių mirties sindromo, osteomaliacijos ir osteoporozės. Antriniai aminorūgščių apykaitos sutrikimai gali būti susiję su kepenų, virškinamojo trakto (pavyzdžiui, opiniu kolitu, Krono liga), inkstų (pavyzdžiui, Fanconi sindromu), nepakankama ar netinkama mityba, neoplazmomis. Ankstyva diagnozė ir savalaikis gydymas gali užkirsti kelią ligos simptomams vystytis ir progresuoti.

Šis tyrimas leidžia kompleksiškai nustatyti standartinių ir neproteinogeninių aminorūgščių bei jų darinių koncentraciją kraujyje bei įvertinti aminorūgščių apykaitos būklę.

Alaninas (A.L.A.) žmogaus organizme gali būti sintetinamas iš kitų aminorūgščių. Jis dalyvauja gliukoneogenezės procese kepenyse. Kai kuriais duomenimis, padidėjęs alanino kiekis kraujyje yra susijęs su padidėjusiu kraujospūdžiu, kūno masės indeksu ir kt.

Argininas (A.R.G.) Priklausomai nuo organizmo amžiaus ir funkcinės būklės, ji priskiriama pusiau nepakeičiamoms aminorūgštims. Dėl fermentų sistemų nebrandumo neišnešioti kūdikiai nesugeba jo suformuoti, todėl jiems reikia išorinio šios medžiagos šaltinio. Padidėjęs arginino poreikis atsiranda streso, chirurginio gydymo, traumų metu. Ši aminorūgštis dalyvauja ląstelių dalijimuisi, žaizdų gijimui, hormonų išsiskyrimui, azoto oksido ir karbamido susidarymui.

asparto rūgštis (A.S.P.) gali susidaryti iš citrulino ir ornitino ir yra kai kurių kitų aminorūgščių pirmtakas. Asparto rūgštis ir asparaginas (ASN) dalyvauja gliukoneogenezėje, purino bazių sintezėje, azoto metabolizme ir ATP sintetazės veikloje. Nervų sistemoje asparaginas atlieka neurotransmiterio vaidmenį.

Citrulinas (CIT) gali susidaryti iš ornitino arba arginino ir yra svarbus karbamido ciklo kepenyse (ornitino ciklo) komponentas. Citrulinas yra filagrino, histonų komponentas ir vaidina vaidmenį autoimuniniame uždegime sergant reumatoidiniu artritu.

glutamo rūgštis (G.L.U.) – nepakeičiama aminorūgštis, kuri turi didelę reikšmę azoto apykaitai. Laisvoji glutamo rūgštis naudojama maisto pramonėje kaip skonio stipriklis. Glutamo rūgštis ir glutamatas yra svarbūs nervų sistemos sužadinimo neurotransmiteriai. Klasikinės fenilketonurijos atveju pastebimas sumažėjęs glutamato išsiskyrimas.

Glicinas (GLY) yra nepakeičiama aminorūgštis, kuri gali susidaryti iš serino, veikiant piridoksinui (vitaminui B6). Dalyvauja baltymų, porfirinų, purinų sintezėje ir yra slopinantis centrinės nervų sistemos siųstuvas.

metioninas (MET) – nepakeičiama aminorūgštis, kurios didžiausias kiekis nustatomas kiaušiniuose, sezamo sėklose, grūduose, mėsoje, žuvyje. Iš jo gali susidaryti homocisteinas. Dėl metionino trūkumo išsivysto steatohepatitas.

Ornitinas (ORN) nėra užkoduotas žmogaus DNR ir nedalyvauja baltymų sintezėje. Ši aminorūgštis susidaro iš arginino ir atlieka pagrindinį vaidmenį karbamido sintezėje ir amoniako pašalinime iš organizmo. Ornitino turintys preparatai naudojami cirozei ir asteniniam sindromui gydyti.

Fenilalaninas (PHE) – nepakeičiama aminorūgštis, kuri yra tirozino, katecholaminų, melanino pirmtakas. Dėl genetinio fenilalanino apykaitos defekto kaupiasi aminorūgštis ir jos toksiški produktai bei išsivysto aminoacidopatija – fenilketonurija. Liga siejama su psichinės ir fizinės raidos sutrikimais bei traukuliais.

Tirozinas (TYR) patenka į organizmą su maistu arba yra sintetinamas iš fenilalanino. Tai neurotransmiterių (dopamino, norepinefrino, adrenalino) ir pigmento melanino pirmtakas. Esant genetiniams tirozino apykaitos sutrikimams, atsiranda tirozinemija, kurią lydi kepenų, inkstų pažeidimai ir periferinė neuropatija. Svarbi diferencinė diagnostinė vertė yra tai, kad fenilketonurijos metu kraujyje nepadidėja tirozino kiekis, priešingai nei kai kurios kitos patologinės būklės.

Valinas (VAL), leucinas (LEU) Ir izoleucinas (ILEU)– nepakeičiamos aminorūgštys, kurios yra svarbūs raumenų ląstelių energijos šaltiniai. Sergant fermentopatijomis, kurios sutrikdo jų medžiagų apykaitą ir sukelia šių aminorūgščių (ypač leucino) kaupimąsi, atsiranda „klevų sirupo liga“ (leucinozė). Patognomoninis šios ligos požymis yra saldus šlapimo kvapas, panašus į klevų sirupą. Aminoacidopatijos simptomai pasireiškia ankstyvame amžiuje ir apima vėmimą, dehidrataciją, mieguistumą, hipotenziją, hipoglikemiją, traukulius ir opistotoniją, ketoacidozę ir centrinės nervų sistemos patologijas. Liga dažnai baigiasi mirtimi.

Hidroksiprolinas (HPRO) susidaro hidroksilinant proliną, veikiant vitaminui C. Ši aminorūgštis užtikrina kolageno stabilumą ir yra pagrindinis jo komponentas. Trūkstant vitamino C, sutrinka hidroksiprolino sintezė, mažėja kolageno stabilumas ir atsiranda gleivinių pažeidimai – skorbuto simptomai.

Serinas (SER) yra beveik visų baltymų dalis ir dalyvauja daugelio organizmo fermentų (pavyzdžiui, tripsino, esterazių) aktyvių centrų formavime ir kitų nepakeičiamų aminorūgščių sintezėje.

Glutaminas (GLN) yra iš dalies pakeičiama aminorūgštis. Jo poreikis gerokai išauga dėl traumų, kai kurių virškinimo trakto ligų, intensyvaus fizinio krūvio. Dalyvauja azoto apykaitoje, purinų sintezėje, rūgščių ir šarmų pusiausvyros reguliavime, atlieka neurotransmiterio funkciją. Ši aminorūgštis pagreitina gijimo ir atsigavimo procesus po traumų ir operacijų.

Gama-aminosviesto rūgštis (GABA) sintetinamas iš glutamino ir yra svarbiausias slopinantis neurotransmiteris. GABA vaistai naudojami įvairiems neurologiniams sutrikimams gydyti.

Beta-aminoizosviesto rūgštis (BAIBA) yra timino ir valino metabolizmo produktas. Jo kiekio kraujyje padidėjimas stebimas esant beta-aminoizobutirato-piruvato aminotransferazės trūkumui, nevalgius, apsinuodijus švinu, spinduline liga ir kai kuriais navikais.

Alfa aminosviesto rūgštis (AABA)– oftalminės rūgšties, kuri yra glutationo analogas akies lęšyje, sintezės pirmtakas.

Beta alaninas (BALA), skirtingai nei alfa-alaninas, jis nedalyvauja baltymų sintezėje organizme. Ši aminorūgštis yra karnozino dalis, kuri kaip buferinė sistema neleidžia rūgščių kauptis raumenyse fizinio krūvio metu, mažina raumenų skausmą po treniruotės, pagreitina atsigavimo procesus po traumų.

Histidinas (HIS)– nepakeičiama aminorūgštis, kuri yra histamino pirmtakas, yra daugelio fermentų aktyvių centrų dalis, randama hemoglobine ir skatina audinių atstatymą. Retas genetinis histidazės defektas sukelia histidinemiją, kuri gali sukelti hiperaktyvumą, vystymosi vėlavimą, mokymosi sunkumus ir kai kuriais atvejais protinį atsilikimą.

Treoninas (THRE)– nepakeičiama aminorūgštis, būtina baltymų sintezei ir kitų aminorūgščių susidarymui.

1-metilhistidinas (1MHIS) yra anserino darinys. 1-metilhistidino koncentracija kraujyje ir šlapime koreliuoja su mėsinių maisto produktų vartojimu ir didėja, kai trūksta. Šio metabolito kiekis padidėja, kai kraujyje trūksta karozinazės ir stebimas sergant Parkinsono liga bei išsėtine skleroze.

3-metilhistidinas (3MHIS) yra aktino ir miozino metabolizmo produktas ir atspindi baltymų skilimo raumenų audinyje lygį.

Prolinas (PRO) organizme sintetinamas iš glutamato. Hiperprolinemija dėl genetinio fermentų defekto arba dėl netinkamos mitybos, padidėjusio pieno rūgšties kiekio kraujyje ar kepenų ligų gali sukelti traukulius, protinį nuovargį ir kitas neurologines patologijas.

Lizinas (LYS)– nepakeičiama aminorūgštis, dalyvaujanti kolageno susidarymo ir audinių atstatymo procese, imuninės sistemos veikloje, baltymų, fermentų ir hormonų sintezėje. Glicino trūkumas organizme sukelia asteniją, atminties praradimą ir reprodukcinių funkcijų sutrikimus.

Alfa aminoadipo rūgštis (AAA)– tarpinis lizino metabolizmo produktas.

Cisteinas (CYS) yra nepakeičiama aminorūgštis vaikams, pagyvenusiems žmonėms ir žmonėms, turintiems maistinių medžiagų malabsorbcijos. Sveikiems žmonėms ši aminorūgštis sintetinama iš metionino. Cisteinas yra plaukų ir nagų keratino dalis, dalyvauja formuojant kolageną, yra antioksidantas, glutationo pirmtakas ir apsaugo kepenis nuo žalingo alkoholio metabolitų poveikio. Cistinas yra dimerinė cisteino molekulė. Esant genetiniam cistino transportavimo inkstų kanalėliuose ir žarnyno sienelėse defektui, atsiranda cistinurija, dėl kurios inkstuose, šlapimtakiuose ir šlapimo pūslėje susidaro akmenys.

Cistationinas (CYST)– tarpinis cisteino metabolizmo produktas sintezės metu iš homocisteino. Su paveldimu fermento cistationazės trūkumu arba įgyta hipovitaminoze B 6, padidėja cistationino kiekis kraujyje ir šlapime. Ši būklė apibūdinama kaip cistationinurija, kuri yra gerybinė, be akivaizdžių patologinių požymių, tačiau retais atvejais gali pasireikšti kaip intelekto trūkumas.

Cisteino rūgštis (CYSA) susidaro cisteino oksidacijos metu ir yra taurino pirmtakas.

Taurinas (TAU) sintetinamas iš cisteino ir, skirtingai nei aminorūgštys, yra sulfonrūgštis, kurioje vietoj karboksilo grupės yra sulfono grupė. Taurinas yra tulžies dalis, dalyvauja emulsinant riebalus, yra slopinantis neurotransmiteris, gerina reparacinius ir energetinius procesus, turi kardiotoninių ir hipotenzinių savybių.

Amino rūgštys ir baltymai plačiai naudojami sportinėje mityboje ir naudojami raumenų masei didinti. Vegetarai dėl gyvulinių baltymų trūkumo savo mityboje gali patirti kai kurių nepakeičiamų aminorūgščių trūkumą. Šis tyrimas leidžia įvertinti tokių mitybos rūšių adekvatumą ir prireikus atlikti jų korekciją.

Kam naudojamas tyrimas?

• Paveldimų ir įgytų ligų, susijusių su aminorūgščių apykaitos sutrikimais, diagnostika;
• azoto apykaitos sutrikimų priežasčių diferencinė diagnostika, amoniako pašalinimas iš organizmo;
• stebėti dietos terapijos laikymąsi ir gydymo efektyvumą;
• mitybos būklės įvertinimas ir mitybos keitimas.

Kada numatytas tyrimas?

• Jei yra įtarimas dėl aminorūgščių apykaitos pažeidimo vaikams, įskaitant naujagimius (vėmimas, viduriavimas, metabolinė acidozė, ypatingas vystyklų kvapas ir spalva, sutrikusi protinė raida);
• su hiperamonemija (padidėjęs amoniako kiekis kraujyje);
• su sunkia šeimos istorija, giminaičių įgimtų aminoacidopatijų buvimas;
• stebint mitybos rekomendacijų laikymąsi, gydymo efektyvumą;
• tiriant sportininkus (pavyzdžiui, kultūristus), kurie vartoja sportinę mitybą (baltymus ir aminorūgštis);
• tiriant vegetarus.

Ką reiškia rezultatai?

• Alaninas (ALA):

• Argininas (ARG):

• Asparto rūgštis (ASP):

• Citrulinas (CIT):

• Glutamo rūgštis (GLU):

• Glicinas (GLY)

• Metioninas (MET)

• Ornitinas (ORN)

• Fenilalaninas (PHE)

• Tirozinas (TYR)

• Valinas (VAL)

• Leucinas (LEU)

• Izoleucinas (ILEU)

• Hidroksiprolinas (HPRO)

• Serinas (SER)

• Asparaginas (ASN)

• Alfa-aminoadipo rūgštis (AAA)

• Glutaminas (GLN)

• Beta-alaninas (BALA): 0 - 5 µmol/l.
• Taurinas (TAU)

• Histidinas (HIS)

• Treoninas (THRE)

• 1-metilhistidinas (1MHIS)

• 3-metilhistidinas (3MHIS)

• Gama-aminosviesto rūgštis (GABA)

• Beta-aminoizosviesto rūgštis (BAIBA)

• Alfa-aminosviesto rūgštis (AABA): 0–40 µmol/l.
• Prolinas (PRO)

• Cistationinas (CYST): 0 - 0,3 µmol/l.
• Lizinas (LYS)

• Cistinas (CYS)

• Cisteino rūgštis (CYSA): 0.

Rezultatų interpretavimas atliekamas atsižvelgiant į amžių, mitybos įpročius, klinikinę būklę ir kitus laboratorinius duomenis.

Bendras aminorūgščių kiekis kraujyje gali padidėti, jei:

• eklampsija;
• sutrikusi fruktozės tolerancija;
• diabetinė ketoacidozė;
• inkstų nepakankamumas;
• Reye sindromas.

Bendras aminorūgščių kiekis kraujyje gali sumažėti, kai:

• antinksčių žievės hiperfunkcija;
• karščiavimas;
• Hartnupo liga;
• Huntingtono chorėja;
• netinkama mityba, badavimas (kwashiorkore);
• malabsorbcijos sindromas sergant sunkiomis virškinamojo trakto ligomis;
• hipovitaminozė;
• nefrozinis sindromas;
• pappataci karštligė (uodai, flebotomija);
• reumatoidinis artritas.

Pirminės aminoacidopatijos

Skatinimas argininas, glutaminas- arginazės trūkumas.

Skatinimas arginino sukcinatas, glutaminas- arginosukcinazės trūkumas.

Skatinimas citrulinas, glutaminas- citrulinemija.

Skatinimas cistinas, ornitinas, lizinas- cistinurija.

Skatinimas valinas, leucinas, izoleucinas– klevų sirupo liga (leucinozė).

Skatinimas fenilalaninas– fenilketonurija.

Skatinimas tirozino– tirozinemija.

Antrinės aminoacidopatijos

Skatinimas glutaminas- hiperamonemija.

Skatinimas alaninas- pieno rūgšties acidozė (laktatacidozė).

Skatinimas glicinas– organinė acidurija.

Skatinimas tirozino- trumpalaikė tirozinemija naujagimiams.

Literatūra

• 8 dalis. Amino rūgštys. In: Scriver CR, Beaudet AL, Valle D, Sly WS, Childs B, Kinzler KW, Vogelstein B, eds. Metabolinė ir molekulinė paveldimų ligų bazė. 8-asis leidimas Niujorkas, NY: McGraw-Hill, Inc; 2001;1665-2105.
• IV dalis. Aminorūgščių apykaitos ir transportavimo sutrikimai. Fernandes J, Saudubray J-M, Van den Berghe G, red. Įgimtų medžiagų apykaitos ligų diagnostika ir gydymas. 3-asis leidimas Niujorkas, NY: Springeris; 2000;169-273.
• 2 dalis. Aminorūgščių apykaitos sutrikimai. Nyhan WL, Barshop BA, Ozand PT, red. Metabolinių ligų atlasas. 2-asis leidimas Niujorkas, NY: Oxford University Press Inc; 2005;109-189.
• Blau N, Duran M, Blaskovics ME, Gibson KM, red. Metabolinių ligų laboratorinės diagnostikos gydytojo vadovas. 2-asis leidimas Niujorkas, NY: Springeris; 2003 m.
• Žmogaus metabolizmo duomenų bazė. Prieigos režimas: http://www.hmdb.ca/

Šiuolaikinėje eroje, klestint gamtos mokslinei minčiai, ypatingas dėmesys buvo pradėtas skirti „gyvūnų elektrai“. Smalsius protus sujaudino Luigi Galvani eksperimentai, kurie sutraukė varlės koją. Vėliau, atsiradus „volto kolonai“, visi, kurie laikė save šiuolaikiniu žmogumi ir gamtos mokslininku, atliko panašius eksperimentus. Fizinės raumenų audinio savybės buvo tiriamos naudojant srovę, o „panašumo į Kūrėją“ apoteozė buvo laikoma patirtimi, kai nuolatinės srovės impulsas privertė susitraukti lavono raumenis.

Tobulėjant elektrotechnikai ir atsiradus Faradėjaus eksperimentams, atsirado nauja įranga, kuri leido gauti magnetinius laukus naudojant srovę ir atvirkščiai. Taip pamažu gimė mintis naudoti ne tiesioginę elektros srovę, o magnetinį lauką paveikti smegenų žievės sritis. Juk dėl magnetinio lauko atsiranda elektros srovė, o tai jau sukelia įvairius procesus organizme. Iš šios idėjos gimė metodas, vadinamas transkranijine magnetine terapija. Kas tai yra ir kaip mokslas jį apibrėžia?

Apibrėžimas

TCMS, arba transkranijinė magnetinė stimuliacija, yra mokslinėje ir klinikinėje praktikoje naudojamas metodas, leidžiantis be skausmo ir elektros srovės indukcijos stimuliuoti smegenų žievę magnetiniu lauku per atstumą, gaunant skirtingas reakcijas į trumpų impulsų poveikį. magnetinis laukas. Šis metodas naudojamas tiek diagnozuojant, tiek gydant tam tikras ligas.

Technikos esmė ir veikimo mechanizmas

Elektromagnetinės smegenų stimuliacijos prietaisas yra pagrįstas elektromagnetinės indukcijos sužadinimo principu. Yra žinoma, kad srovė, einanti per induktorių, sukuria magnetinį lauką. Jeigu pasirinksime tokias srovės ir ritės charakteristikas, kad magnetinis laukas būtų stiprus, o sūkurinės srovės minimalios, tai turėsime TKMS įrenginį. Pagrindinė įvykių seka gali būti tokia:

Įrenginio blokas generuoja didelės amplitudės srovių impulsus, iškraunančius kondensatorių, kai aukštos įtampos signalas trumpinamas. Kondensatorius išsiskiria didele srove ir aukšta įtampa – šios techninės charakteristikos yra labai svarbios norint gauti stiprius laukus.

Šios srovės nukreipiamos į rankinį zondą, ant kurio yra magnetinio lauko generatorius – induktorius.

Zondas juda labai arti galvos odos, todėl sugeneruotas iki 4 Teslų magnetinis laukas perduodamas į smegenų žievę.

Šiuolaikiniai induktoriai turi priverstinį aušinimą, nes jie vis tiek labai įkaista dėl sūkurinių srovių. Jomis negalima liesti paciento kūno – galite nusideginti.

Keturios Teslos yra labai įspūdinga vertė. Pakanka pasakyti, kad tai viršija didelio lauko magnetinio rezonanso tomografijos skaitytuvų, gaminančių 3 Teslas ant didelio elektromagnetų žiedo, galią. Šią vertę galima palyginti su duomenimis iš didžiojo hadronų greitintuvo didžiųjų dipolių magnetų.

Stimuliacija gali būti atliekama įvairiais režimais - vienfaziu, dvifaziu ir pan. Galite pasirinkti induktoriaus ritės tipą, leidžiantį įvairioms smegenų gelmėms suteikti skirtingai sufokusuotą magnetinį lauką.

Žievėje generuojami antriniai procesai – neuronų membranų depoliarizacija ir elektrinio impulso generavimas. TMS metodas leidžia, judant induktorių, pasiekti skirtingų žievės sričių stimuliavimą ir gauti skirtingą atsaką.

Transkranijinei magnetinei stimuliacijai reikia interpretuoti rezultatus. Pacientui siunčiama eilė skirtingų impulsų, kurių rezultatas yra minimalios motorinės reakcijos slenkstis, jo amplitudė, delsos laikas (latencija) ir kiti fiziologiniai rodikliai.

Jei gydytojas veikia žievę, kamieno raumenys gali susitraukti pagal „motorinį homunkulą“, tai yra, pagal motorinės zonos raumenų žievės vaizdą. Tai yra EP nariai arba motoriniai potencialai.

Jei pritaikysite jutiklius norimam raumeniui ir atliksite elektroneuromiografiją, galite „skambinti“ nervinį audinį, atsižvelgdami į sukelto impulso ypatybes.

Procedūros indikacijos

Be tyrimo funkcijos, neuronų sukurtas „dirbtinis“ impulsas gali turėti gydomąjį poveikį raumenų ligoms. Vaikams, sergantiems cerebriniu paralyžiumi, TCMS procedūra skatina raumenų vystymąsi ir teigiamai veikia spazmiškumą. Transkranijinė magnetinė stimuliacija naudojama diagnozuoti ir gydyti šias ligas:

• išsėtinė sklerozė ir kitos demielinizuojančios ligos;
• smegenų aterosklerozė, difuziniai smegenų kraujagyslių pažeidimai;
• galvos ir nugaros smegenų žaizdų ir traumų pasekmės;
• radikulopatija, mielopatija, kaukolės nervų pažeidimas (Bell'o paralyžius);
• Parkinsono liga ir antrinis parkinsonizmas;
• įvairios demencijos (Alzheimerio liga).

Be to, transkranijinės magnetinės stimuliacijos metodas gali padėti diagnozuoti kalbos sutrikimus, su neurogenine šlapimo pūsle susijusias problemas, angiocefalgiją (migreną) ir epilepsiją.

Sukaupta solidi patirtis (dažniausiai užsienio) naudojant šią techniką sergant depresija, afektinėmis būsenomis ir neurozėmis. TKMS taip pat padeda esant obsesinėms-kompulsinėms būklėms (obsesinei neurozei). Jo kurso naudojimas padeda pašalinti psichozės simptomus šizofrenijos paūmėjimo metu, taip pat įvairių haliucinacijų metu.

Tačiau toks metodas, kuriame naudojami stiprūs magnetiniai laukai, turi kontraindikacijų.

Kontraindikacijos

Nepaisant to, kad TCMS yra neinvazinė technika, jos poveikis yra stiprūs magnetiniai laukai. Reikia atsiminti, kad skirtingai nuo MRT, kai visas žmogaus kūnas yra veikiamas galingo magnetinio lauko, transkranijinė magnetinė terapija jį generuoja kelių centimetrų atstumu. Yra keletas rimtų ir net absoliučių jo įgyvendinimo kontraindikacijų, pavyzdžiui, feromagnetinės medžiagos kaukolės viduje (implantai) arba klausos aparatai. Širdies stimuliatorius taip pat yra kontraindikacija, tačiau teorinė, nes ji gali tik atsitiktinai patekti į magnetinio lauko sritį.

Šiuo metu atsirado prietaisų, skirtų giliai smegenų stimuliacijai, pavyzdžiui, sergant Parkinsono liga. Tokiu atveju procedūra taip pat yra kontraindikuotina.

Tarp klinikinių kontraindikacijų yra:

• židininiai centrinės nervų sistemos dariniai, galintys sukelti epilepsijos priepuolį;
• skiriant vaistus, galinčius padidinti smegenų žievės jaudrumą (ir gauti sinchroninį išsiskyrimą);
• trauminis smegenų pažeidimas su ilgalaikiu sąmonės netekimu;
• anamnezinis – priepuolis arba epilepsija, epiaktyvumas encefalogramoje;
• padidėjęs intrakranijinis spaudimas.

Kaip matyti iš to, kas išdėstyta aukščiau, pagrindinis pavojus yra gauti sinchroninį pusrutulio arba bendrą žievės neuronų sužadinimo židinį arba epilepsijos priepuolį.

Apie šalutinį poveikį

Būtų naivu manyti, kad toks rimtas poveikis, kaip antrinė nervinio veikimo potencialo indukcija stipriu magnetiniu lauku, gali pasireikšti be jokio šalutinio poveikio. Dažniausiai pasitaikančios sąlygos apima:

• diskomfortas skrandyje ir pykinimas;
• netikėtų raumenų susitraukimų baimė;
• odos paraudimas;
• laikinas kalbos praradimas (stimuliuojant Brokos sritį), dažnai lydimas audringo juoko;
• galvos ir veido raumenų skausmas;
• galvos svaigimas ir nuovargis;
• laikinas klausos praradimas.

Prietaisas taip pat labai atsargiai naudojamas dirbant su vaikais. Stimuliuojant vaiko motorinius veiksmus sunku iš jo tikėtis visiškos kontrolės ir atsipalaidavimo. Kyla pavojus, kad jei zondas ir spiralė netyčia bus praleisti šalia širdies, prietaisas gali sukelti širdies aritmiją. Paprastai magnetinis laukas sukelia ekstrasistolę, todėl pagalbos nereikia. Tačiau pacientams, sergantiems prieširdžių virpėjimu ir tirotoksikoze, tai gali pabloginti būklę.

Mūsų kūdikiui priepuoliai prasidėjo 2,5 mėnesio, bet niekas nenumatė jų pradžios. Nėštumas ir gimdymas praėjo gerai, paveldimumo nebuvo. Todėl mums tapo labai svarbu surasti kūdikio epilepsijos priežastį, kad suprastume, kaip koreguoti gydymą ir ar dar galime planuoti vaikus.

Visų pirma, skubos tvarka, jei tai ką tik atsitiko jūsų vaikui ir jūs nežinote priepuolių priežasties, turite imtis:

1) Kraujas ant „TMS“ (tandeminė masės spektrometrija (acilkarnitinų, aminorūgščių spektras)). Nepamirškite, kad kapiliarinis kraujas dovanojamas specialia forma.

2) Dieninis ir rytinis šlapimas „Šlapimo mėginių dujų chromatografijai (organinė acidurija)“
Jei jūsų vaikas turi ką nors iš paveldimų medžiagų apykaitos ligų sąrašo, kuo anksčiau sužinosite, tuo greičiau galėsite pradėti specialų gydymą ir tuo didesnė tikimybė, kad vaikas normaliai vystysis. Laikas čia prieš tave.

Šiuos testus atlikome (populiariai tiesiog „centre Moskvarechye, 1“). Tinklalapis Deja, TMS kraujo tyrimas trunka apie 14 dienų. Todėl, siekdami greičio, mes taip pat paaukojome kraujo TMS MC "Genomed". Taip turėsite galimybę greičiau gauti rezultatus ir palyginti juos, kai padarysite abi išvadas.

Jei jūsų vaiko priepuoliai prasidėjo naujagimio laikotarpiu, prasminga paaukoti kraują „Skyriai „NBO su naujagimių periodu“ (aminorūgštys, acilkarnitinai, šlapimo organinės rūgštys, labai ilgos grandinės riebalų rūgštys, izofokusuojantys transferinai) “ Medicinos genetinių tyrimų centre (populiariai tiesiog „centras Moskvarečėje, 1“).

3) „MNL atrankos testai“ analizė V Medicinos genetinių tyrimų centras(populiariai tiesiog „centras prie Moskvarečės, 1“). Tai yra lizosomų fermentų aktyvumo nustatymas išdžiūvusiame kraujuje: β-D-gliukozidazė, a-D-gliukozidazė, a-L-iduronidazė, sfingomielinazė, galaktocerebrozidazė, a-galaktozidazė). TMS analizės, mes paprašėme šių. Padarykite dar kelis kraujo lašus, nes tą patį kraują galite naudoti dviem tyrimams. Tai padarėme ir Medicinos genetinių tyrimų centre (populiariai tiesiog „centras Moskvarečėje, 1“).

4) Biotinidazės aktyvumo analizė V Medicinos genetinių tyrimų centras(populiariai tiesiog „centras prie Moskvarečės, 1“). Kaip mums paaiškino, šis parametras yra „kraujo TMS“ analizės sąraše, tačiau kartais bendrosios analizės metu jis rodo normą, o pakartotinai tiriant specialiai biotinidazei, gali rodyti nukrypimą. Tai trunka 1-2 savaites.

5) Analizės skydelis Paveldima epilepsija"MC "Genomed"(kaina 33 000 rublių). Padarykite tai iš karto, nes... jie iš esmės sudaro 4–5 kalendorinius mėnesius. Ir laikas nelaukia. Jame yra visi genų defektai, galintys sukelti epilepsiją. Jei jie nustato geno lūžį, tada yra galimybė sužinoti, kaip gydomi vaikai, turintys tą patį geno trūkį. Po analizės būtinai užsiregistruokite konsultacijai, geriausia su.

​

Yra genetikos centrai Vokietija Ir JAV. Galite jiems parašyti.

6) Analizė Išplėsta chromosomų mikrogardelių analizė» Genomed MC (kainavo 30 000 rublių). Tai tarsi kariotipas, tik kruopštesnis. Jie ieško chromosomų skilimo, kuris gali sukelti vystymosi sutrikimus. Jie tai daro 14-30 dienų.

7) Retųjų ligų ir kitų retų ligų centras vaikams su Morozovo ligoninė. Mes dar nebuvome, bet planuojame eiti pas juos su visais tyrimais, kad jie pasakytų, kokius dar tyrimus galime atlikti, kad surastume kūdikio epilepsijos priežastį. Informaciją papildysime po vizito.

8) Michailova S.V. - Rusijos vaikų klinikinės ligoninės Medicininės genetikos skyriaus vedėja Visus jūsų tyrimus galite siųsti el. paštu, temoje nurodykite Michailovai S.V. . Jūsų testai bus išsiųsti jai ir per kelias dienas atsiųs susitikimo protokolą, kuriame bus nurodyta, kokius tyrimus dar galite atlikti ir į ką rekomenduoja kreiptis.

9) Zakharova E.Yu - vadovas. Medicinos genetinių tyrimų centro paveldimų medžiagų apykaitos ligų laboratorija (Moskvorechye, 1). Taip pat galite išsiųsti laišką elektroninio pašto adresu (temos eilutėje nurodykite E.Yu. Zakharova), su ligos eigos aprašymu, savo tyrimais ir paprašyti patarimo, kokius dar tyrimus galima atlikti.

10) Charkovo specializuotas medicinos genetikos centras (KSMGC) vadovaujant medicinos mokslų daktarui Grechanina Julija Borisovna. Forume „Angelų vaikai“ yra visa tema apie šį institutą, kur galite siųsti šlapimą traukiniu analizei. Jūs siunčiate savo ligos istoriją, visus tyrimus, išvadas el. paštu, siunčiate šlapimą traukiniu ir centro specialistai pateikia rekomendacijas.

1 Rusijos medicinos mokslų akademijos federalinė valstybės biudžetinė įstaiga „Medicininių genetinių tyrimų centras“.

2 Valstybinė biudžetinė aukštojo profesinio mokymo įstaiga „Rusijos sveikatos apsaugos ministerijos Rostovo valstybinis medicinos universitetas“

3 GBUZ „Regioninė klinikinė ligoninė Nr. 1, pavadinta profesoriaus S. V. Očapovskio vardu“ Krasnodaro krašto sveikatos departamentas

4 Federalinė valstybės biudžetinė įstaiga „Medicininių genetinių tyrimų centras“

Siekiant pagrįsti pradėtą ​​masinę naujagimių patikrą dėl paveldimų medžiagų apykaitos ligų (HMD), naudojant tandeminę masės spektrometriją (MS/MS), atliktas retrospektyvus pirmaisiais gyvenimo metais mirusių vaikų (n=86) archyvinių kraujo mėginių tyrimas. buvo atlikta. Aminorūgščių ir acilkarnitinų profilių pokyčiai nustatyti 4 atvejais (4,7 proc.). Viename iš jų nustatytas daugkartinis leucino, izoleucino ir valino koncentracijos padidėjimas, būdingas ligai – klevų sirupo šlapimo kvapo ligai. Klinikinis vaizdas ir mutacijos aptikimas pirmame BCKDHB geno egzone (c.98delG) heterozigotinėje būsenoje netiesiogiai patvirtino leucinozės diagnozę. Likusiais trimis atvejais nustatyti aminorūgščių ir acilkarnitinų profilio pokyčiai nėra to paties specifinio pobūdžio. Tokiais atvejais reikėtų pakartotinai atlikti kraujo tyrimus naudojant IS/MS ir atlikti papildomus klinikinius bei biocheminius tyrimus. Atlikus tyrimą, buvo patvirtintas poreikis įdiegti MS/MS metodą į naujagimių NBO patikros programas, siekiant laiku diagnozuoti ir gydyti.

retrospektyvi diagnozė

tandeminė masės spektrometrija

paveldimos medžiagų apykaitos ligos

1. Krasnopolskaya K. D. Paveldimos medžiagų apykaitos ligos. Gydytojų žinynas. - M.: ROO „Vaikų socialinės adaptacijos ir reabilitacijos centras „Fohat“, 2005. - 364 p.

2. Mikhailova S.V., Zakharova E.Yu., Petrukhin A.S. Vaikų ir paauglių neurometabolinės ligos. Diagnostikos ir gydymo metodai. - M.: „Literra“, 2011. - 352 p.

3. Chace H. D. Greita MCAD trūkumo diagnozė kiekybinė oktanoilkarnitino ir kitų acilkarnitinų naujagimių kraujo dėmių analizė tandeminės masės spektrometrijos būdu / Chace H. D., Hillman S. L., Van Hove J. L. ir kt. // Klinikinė chemija. - 1997. - V. 43. - Nr. 11. - R. 2106-2113.

4. Nyhan L. W., Barshop B. A., Ozand P. T. Metabolinių ligų atlasas. - Antrasis leidimas. - Londonas: Hodder Arnold, 2005. - 788 p.

5. Rashed M. S. Klinikinis tandeminės masės spektrometrijos taikymas: dešimties metų diagnozė ir paveldimų medžiagų apykaitos ligų patikra // J. of Chrom. B. - 2001. - V. 758. - Nr. 27-48.

6. Sweetman L. Vardų suteikimo ir skaičiavimo sutrikimai (sąlygos), įtraukti į naujagimių atrankos paneles / Sweetman L., Millington D. S., Therrell B. L. et al. // Pediatrija. - 2006. - V. 117. - P. 308-314.

7. Van Hove J. L. Vidutinės grandinės acl-CoA dehidrogenazės trūkumas: diagnozė pagal acilkarnitito analizę kraujyje / Van Hove J. L., Zhang W., Kahler S. G. ir kt. //Esu. J.Hum. Genet. - 1993. - V. 52. - P. 958-966.

Įvadas

Šiandien žinoma daugiau nei 500 nosologinių paveldimų medžiagų apykaitos ligų (HMD) formų. Pagrindinė NBO dalis yra itin reta, tačiau bendras jų dažnis populiacijoje yra 1:1000-1:5000. Paprastai NBO pirmaisiais gyvenimo metais pasireiškia nespecifiniais simptomais, kurie kliniškai juos maskuoja kaip kitą, nepaveldimą somatinę patologiją. Kartu svarbu laiku diagnozuoti paveldimas metabolines ligas, nes daugeliui iš jų buvo sukurti ir toliau kuriami veiksmingi patogenetinio gydymo metodai, be kurių ligų baigtis dažnai lieka mirtina. Visuotinai pripažįstama, kad vienas iš labiausiai pagrįstų ir veiksmingiausių būdų ankstyvam paveldimos patologijos nustatymui yra naujagimių genetinė patikra. Sukūrus tandeminę masių spektrometriją (MS/MS) su elektropurškimo jonizacija, iki XX amžiaus 90-ųjų pabaigos didelio masto masių spektrometrinis atranka tapo pritaikyta NBO masinio tyrimo praktikoje. Šis labai jautrus mikrometodas leidžia vienu metu keliuose mikrolitruose kraujo nustatyti dešimčių aminorūgščių ir acilkarnitinų, svarbių NBO diagnozei, koncentracijas. MS/MS laboratorinio tyrimo veiksmingumas leido įtraukti jį į vyriausybines naujagimių naujagimių patikros programas dėl aminoacidopatijos, organinės acidurijos ir riebalų rūgščių mitochondrijų β-oksidacijos defektų daugelyje šalių. Tačiau Rusijos Federacijoje MS/MS metodas nebuvo įtrauktas į naujagimių masinio tyrimo sistemą ir yra prieinamas atrankinei NBO patikrai tik keliuose federaliniuose medicinos centruose.

Šio tyrimo tikslas buvo moksliškai pagrįsti poreikį įtraukti MS/MS tyrimus į regionines naujagimių masinio tyrimo programas, skirtas aminoacidopatijų, organinių acidurijų ir riebalų rūgščių mitochondrijų β-oksidacijos defektų diagnostikai, remiantis retrospektyvia masės spektrometrija. sergančių vaikų, kurių ligos baigiasi mirtimi pirmaisiais gyvenimo metais, kraujo mėginių analizė.

Pacientai ir tyrimo metodai

Šiame retrospektyviniame tyrime dalyvavo vaikai (n=86, berniukų ir mergaičių santykis 48/38), kurie mirė pirmaisiais gyvenimo metais (nuo 5 dienų iki 11 gyvenimo mėnesių) per vienerius kalendorinius metus (2010 m.) Lietuvos Respublikos administracinėje teritorijoje. Krasnodaro teritorija. Tyrime dalyvavo vaikai, sergantys įgimtais apsigimimais (n=29), infekcinėmis ligomis – pneumonija, sepsiu, bakteriniu meningoencefalitu (n=37), perinataliniais centrinės nervų sistemos pažeidimais (n=11), staigios mirties sindromu (n=6) ir kitomis ligomis. (n=3). Kontrolinę grupę sudarė 438 kliniškai sveiki naujagimiai (227 mergaitės, 211 berniukų), kurių amžius buvo 3-8 dienos. Šioje grupėje buvo nustatytos sveikų naujagimių vaikų aminorūgščių ir acilkarnitinų koncentracijos kapiliariniame kraujyje pamatinės vertės.

Tyrimo medžiaga buvo archyviniai periferinio kraujo mėginiai standartinėse popierinėse tyrimo formose, paimti 3–8 gyvenimo dienomis standartinei naujagimių patikrai. Aminorūgščių ir acilkarnitinų koncentracija kraujyje (1 lentelė) nustatyta tandeminės masės spektrometrijos (MS/MS) metodu, naudojant Agilent 6410 kvadrupolio tandeminį masių spektrometrą (AgilentTechnologies, JAV) pagal CHROMSYSTEM firmos sertifikuotą metodą Nr.V1. 07 05 57136 001. Tyrimas atliktas Rusijos sveikatos apsaugos ministerijos Rostovo valstybinio medicinos instituto medicininės genetikos laboratorijoje.

1 lentelė

MS/MS nustatyti metabolitai

Gautų duomenų statistinis apdorojimas buvo atliktas naudojant Statistica 6.0 taikomųjų programų paketą ir Excel 2007 skaičiuokles.Kintamų aprašomosioms skaitinėms charakteristikoms nustatyti buvo naudojami standartiniai statistinės analizės metodai: medianos, 0,5 ir 99,5 procentilių skaičiavimas.

Norint patvirtinti molekulinę genetinę leucinozės diagnozę, DNR buvo išskirta iš džiovintų kraujo dėmių naudojant DiatomDNAPrep reagentų rinkinį (Biocom LLC, Rusija). Pradmenų atranka PGR amplifikacijai buvo atlikta 10 BCKDHA ir BCKDHB genų egzonų. PGR fragmentų seka, siekiant nustatyti retas mutacijas, buvo atlikta pagal gamintojo protokolą genetiniu analizatoriumi ABIPrism 3500 (AppliedBiosystem, JAV).

Tyrimo rezultatai ir diskusija

Ištyrus aminorūgščių ir acilkarnitinų koncentracijas 438 kliniškai sveikų naujagimių periferiniame kraujyje, buvo nustatytos 0,5 ir 99,5 procentilės tirtų metabolitų koncentracijos, kurias vėliau panaudojome kaip pamatines vertes (2 lentelė). Palyginus 86 vaikų, mirusių pirmaisiais gyvenimo metais, kraujo mėginiuose nustatytas aminorūgščių ir acilkarnitinų koncentracijas su etaloninėmis koncentracijos vertėmis, paaiškėjo, kad 82 pacientams (95,3 proc.) nė vienas iš tirtų rodiklių neperžengė ribos. 0,5 ir 99, kontrolinės grupės 5 procentilis, o tai leido atsisakyti darbinės aminorūgščių ir karnitinų apykaitos sutrikimų, kurie nebuvo patikrinti per visą gyvenimą, versijos. Tačiau 4 vaikams (4,7 proc.) kai kurių aminorūgščių ir acilkarnitinų koncentracijos buvo kelis kartus didesnės už kontrolinės grupės viršutines atskaitos intervalo ribas (2 lentelė).

2 lentelė

Retrospektyvaus aminorūgščių ir acilkarnitino koncentracijos naujagimiams (n=4) įvertinimo rezultatai, kai atskirų metabolitų lygis neviršija 0,5–99,5 procentilių

*Pastaba:

1 pacientas - berniukas KM (diagnozė: obstrukcinis bronchiolitas), mirė 11 mėnesių amžiaus;

2 pacientas - berniukas KF (diagnozė: plaučių uždegimas), mirė 1 mėn.;

3 pacientė - mergaitė LV (diagnozė: sepsis), mirė 12 dienų amžiaus.

4 pacientė - mergaitė PA (diagnozė: pneumonija), mirė 6 dienų amžiaus.

Pirmuoju atveju pacientui KM, mirusiam 11 mėnesių amžiaus, kuriam diagnozuotas obstrukcinis bronchiolitas, tiriant aminorūgščių ir acilkarnitinų tandeminę masių spektrometriją archyviniuose kraujo mėginiuose buvo nustatyti leucino, izoleucino ir valino kiekio pokyčiai, kurie yra pakankamai specifiniai, kad rodytų didelę įgimto metabolinio defekto tikimybę leucino ir izoleucino kataboliniame kelyje. Tirtuose archyviniuose kraujo mėginiuose leucino ir izoleucino koncentracijos padidėjimas buvo nustatytas daugiau nei 9 kartus, valino – daugiau nei 3 kartus, lyginant su kontroliniais dydžiais, kas leidžia diagnozuoti „ligą su klevų sirupo šlapimo kvapu. “

Remiantis turimais klinikiniais duomenimis, CM vaiko leukinozės naudai liudijo šios klinikinės apraiškos: ankstyvas natūralaus maitinimo atsisakymas, naujagimių encefalopatijos simptomai, neurologinių simptomų padidėjimas – raumenų tonuso pokyčiai, traukuliai, epilepsija, sulėtėjusi psichomotorinė raida. Vaikas dažnai sirgo sunkiomis kvėpavimo takų infekcijomis, kurios tapo obliteruojančio bronchiolito priežastimi, dėl kurio mirė 11 mėnesių. Informacijos apie tai, ar vaikas jautė specifinį šlapimo kvapą, neturime, tačiau leucinozei būdingų metabolitų koncentracijos padidėjimas ir būdingi klinikiniai simptomai patvirtina mūsų prielaidą. Be to, klevų sirupo šlapimo kvapo ligos diagnozę patvirtina leucinozės DNR diagnozės, naudojant archyvinius kraujo mėginius, rezultatai. Molekulinė genetinė analizė atskleidė c.98delG deleciją pirmajame BCKDHB geno egzone heterozigotinės būklės vaikui. Ta pati mutacija rasta ir motinos kraujyje. Dėl riboto archyvinių vaiko kraujo mėginių skaičiaus ir jo tėvo biologinės medžiagos trūkumo antrosios mutacijos aptikti nepavyko. Tačiau klinikinių, biocheminių ir molekulinių genetinių duomenų visuma patvirtina leucinozės (arba klevų sirupo šlapimo ligos, MIM ID 248600) diagnozę tirtu atveju.

Likusiais trimis atvejais nustatyti aminorūgščių ir acilkarnitinų profilio pokyčiai nėra tokio paties specifinio pobūdžio kaip ankstesniu atveju. Tokiais atvejais neįmanoma daryti prielaidos, kad tam tikros NBO remiantis MS/MS duomenimis, ir tuo labiau jų tvirtai tvirtinti. Atliekant diferencinę aminoacidopatijos ir organinės acidurijos diagnostiką, reikalingi pakartotiniai kraujo tyrimai naudojant IS/MS, papildomi klinikiniai ir biocheminiai tyrimai.

Ligai būdingų metabolitų padidėjimo laipsnis yra įvairus ir priklauso nuo daugelio veiksnių. Aiškinant rezultatus reikia atsižvelgti į vaiko mitybos pobūdį ir tam tikrų vaistų vartojimą. Taigi, vartojant vaistus, kurių sudėtyje yra valproinės rūgšties arba vidutinės grandinės trigliceridų, padidėja C6, C8 ir C10, todėl sunku diagnozuoti vidutinės grandinės acil-CoAdehidrogenazės trūkumą. Vartojant vaistus, kurių sudėtyje yra karnitino, taip pat gali padidėti trumpos ir vidutinės grandinės acilkarnitinų koncentracija. Ilgos grandinės acilkarnitinų kiekis plazmoje ir visame kraujyje skiriasi, nes jie yra susiję su eritrocitų membranomis, todėl hematokritas turi tam tikrą reikšmę. Išskyrus kai kurias išimtis, pusantro–dvigubai padidėjus koncentracijai, reikia pakartotinai atlikti kraujo tyrimą. Taigi, metabolitų, kurie yra patognonominiai propioninei ir izovalerinei acidurijai, kiekis paprastai padidėja daugiau nei 5 kartus, o net ir nežymiai pasikeitus glutarilkarnitino koncentracijai, reikia ne tik pakartotinai atlikti kraujo tyrimą, bet ir papildomai ištirti organinių rūgščių kiekį šlapime. būdingas I tipo glutaro acidurijai.

Išvada

Retrospektyvus kraujo mėginių iš mažų vaikų, mirusių dėl įvairių priežasčių, tyrimas, atliktas naudojant IS/MS, kai kuriais atvejais parodė paveldimą metabolinę patologiją. Vienas iš jų patvirtino klevų sirupo šlapimu kvepiančios ligos (leucinozės) diagnozę. Laiku atliekamos diagnostikos priemonės tokiais atvejais yra svarbus diferencinės įgimtų medžiagų apykaitos klaidų diagnostikos komponentas. Aminorūgščių ir acilkarnitinų koncentracijų biologinių skysčių mėginiuose tyrimas gali turėti diagnostinę reikšmę kūdikių mirtingumo atvejų analizei. Pomirtinė mirusio vaiko paveldimos medžiagų apykaitos ligos diagnozė yra šeimos medicininės genetinės konsultacijos indikacija. Būtina plačiai diegti naujagimių patikros MS/MS metodą, kaip pagrindinį įrankį nustatant naujagimių aminoacidopatijas, organines acidemijas ir β-mitochondrijų riebalų rūgščių oksidacijos defektus, kad būtų galima laiku diagnozuoti ir gydyti NBO.

Recenzentai:

Polevičenko Elena Vladimirovna, Dr. med. mokslai, profesorius, Federalinio vaikų hematologijos, onkologijos ir imunologijos tyrimų centro reabilitacijos ir medicininės bei socialinės priežiūros skyriaus vyriausiasis mokslo darbuotojas Dmitrijaus Rogačiovo vardu, Rusijos sveikatos apsaugos ministerija, Maskva.

Michailova Svetlana Vitalievna, Dr. med. Mokslai, Federalinės valstybės biudžetinės įstaigos „Rusijos sveikatos apsaugos ministerijos Rusijos vaikų klinikinė ligoninė“, Maskva, Medicininės genetikos skyriaus vedėjas.

Bibliografinė nuoroda