Реакцията на индиректна или пасивна хемаглутинация (RNHA или RPHA) е по-чувствителна и специфична от реакцията на аглутинация. Тази реакция също се използва по два начина.

1) За откриване на антитела в кръвния серум на пациента се използват еритроцитни диагностикуми, при които антигенът се адсорбира върху повърхността на еритроцитите, третирани с танин. Във връзка с тази реакция по-често се използва терминът RPGA.

Тестовият серум се разрежда в ямките на пластмасови плаки и се добавя еритроцитен диагностикум. При положителна реакция по стените на кладенеца се появява тънък филм под формата на "дантелен чадър", при отрицателна реакция се появява гъста утайка от еритроцити под формата на "копче".

2) За откриване на токсини и бактериални антигени в изследвания материал се използват антитела еритроцитни диагностикуми, получени чрез адсорбция на антитела върху еритроцити. Във връзка с тази реакция по-често се използва терминът RNGA. Например, с помощта на диагностикуми на антитела се откриват антигенът на чумния бацил, дифтериен екзотоксин, ботулинов екзотоксин.

реакция на Coombs (аптиглобулинов тест)

Реакцията се използва за откриване на непълни антитела, например антитела срещу Rh фактора. Тестовият серум се добавя към Rh + еритроцити, в които се очаква наличието на непълни антитела срещу Rh фактора. Прикрепени към еритроцитите, непълните антитела не предизвикват аглутинация, тъй като имат само един активен център. След това добавете антиглобулинов серум, съдържащ антитела срещу човешки глобулини. Когато се комбинира с непълни антитела, антиглобулиновият серум причинява аглутинация на еритроцитите.

реакция на утаяване

Същността на реакцията е утаяването (утаяването) на антигена под действието на специфични антитела. Наличието на електролит е необходимо за получаване на видима реакция. Антигенът в реакцията на утаяване са молекулярно диспергирани вещества.

Реакция на пръстеновидно утаяванепоставени в тесни утаителни тръби. Имунният серум се налива в епруветката, върху която внимателно се наслоява тестовият материал. При наличие на антиген в него се образува непрозрачен пръстен от утайка на границата на две течности.

Реакцията се използва в съдебната медицина за определяне на видовете протеини в кръвни петна, в сперма и др.; за определяне на антигена при диагностика на антракс (реакция на Асколи), менингит и други инфекции; в санитарно-хигиенните изследвания - за установяване на фалшификация на хранителни продукти. Имунопреципитиращите серуми се получават чрез имунизиране на животни с подходящ антиген. Например, човешки протеин, утаяващ серум, се получава чрез имунизиране на заек с човешки протеин. Титърът на преципитиращия серум е най-високото разреждане на антигена, с който той реагира. Серумът обикновено се използва неразреден или разреден 1:5.

Реакция на утаяване на агар гелизвършва по няколко начина. Това е реакция на двойна имунодифузия, реакция на радиална имунодифузия, реакция на имуноелектрофореза.

Реакция на двойна имунодифузия(според Ouchterlony). Разтопеният агар гел се изсипва в петриево блюдо и след втвърдяване в него се изрязват ямки. В някои ямки се поставя антиген, в други се поставят имунни серуми, които дифундират в агара, образуват утайка под формата на бели ивици в точката на срещата.

Реакция на радиална имунодифузия(според Манчини). Имунен серум се добавя към разтопения агар гел, изсипва се в чиния. След като агарът се втвърди, в него се изрязват ямки и в тях се поставят антигени, които, дифундирайки в агара, образуват пръстеновидни зони на утаяване около ямките. Колкото по-висока е концентрацията на антигена, толкова по-голям е диаметърът на пръстена. Реакцията се използва например за определяне на различни класове имуноглобулини в кръвта. Имуноглобулините от класовете IgG, IgM, IgA действат като антигени в тази реакция, а антителата срещу тях се съдържат в специфични монорецепторни серуми.

Имуноелектрофореза.Електрофорезата на протеинови антигени се извършва в агар гел. Утаеният серум се въвежда в жлеба, който върви успоредно на посоката на движение на протеините. Антигените и антителата дифундират в агара и в тяхната точка на среща се образуват преципитационни линии.

Реакции на имунен лизис

Антиген (еритроцити или бактерии), комбинирайки се със специфични антитела, образува имунен комплекс, към който е прикрепен комплемент (C1), и активирането на комплемента се извършва по класическия път. Активираният комплемент лизира червените кръвни клетки (хемолиза) или бактериите (бактериолиза). Реакцията на бактериолиза се използва за идентифициране на Vibrio cholerae.

реакция на хемолиза.Антигенът в реакцията е еритроцити, антитела (хемолизини) се съдържат в хемолитичен серум. Хемолизините се прикрепят към еритроцитите, настъпва активиране на комплемента, който лизира еритроцитите. Мътната суспензия от еритроцити се превръща в прозрачна яркочервена течност - „лакова кръв“. Тъй като реакцията на хемолиза възниква само в присъствието на комплемент, тя се използва като индикатор за откриване на комплемент.

Реакция на локална хемолиза в гел(реакция на Jerne) - вариант на реакцията на хемолиза. Служи за определяне на броя на антителообразуващите клетки (AFC) в далака и лимфните възли.

Разтопеният агар гел се смесва със суспензия от клетки на далака и еритроцити и след втвърдяване на агара се добавя комплемент. Около всяка клетка, която произвежда хемолизини, се образува зона на хемолиза. Броят на тези зони определя броя на клетките, произвеждащи хемолизини.

Реакцията на непряка хемаглутинация (RIHA)

Използването на адсорбирани диагностични препарати се основава на принципа на имунологично разпознаване на повърхностни структури, който постоянно се прилага в природата. От тази гледна точка няма принципни разлики между използването например на микробна клетка или изкуствен носител, зареден с антиген (антитела). За основа на сорбираните препарати се използват различни носители - микробни клетки, еритроцити, латекс, бентонин, холестерол, сефадекс, дерматол, активен въглен, гъбични спори и др.

След работата на A.T.Kravchenko (1945) еритроцитите, лишени от жизнеспособност и фиксирани с различни химически реагенти, станаха най-широко използвани като носители на антиген или антитела. На принципа на използване на еритроцити (както естествени, така и фиксирани) като носител на антигена, реакцията на индиректна (пасивна) хемаглутинация е широко разпространена.

Предложението за използване на реакцията на индиректна хемаглутинация (IHA) за диагностични цели възникна въз основа на предварително разработени знания за високата сорбционна активност на еритроцитите. В сравнение с много други носители на антигени и антитела, еритроцитите имат някои предимства в реакцията на индиректна хемаглутинация. Първо, в изотоничните физиологични разтвори те образуват доста стабилна кохезия и не се утаяват за кратко време. Второ, червените кръвни клетки на един и същи животински вид са еднакви по размер. И накрая, еритроцитите сравнително лесно директно или в резултат на специална обработка прикрепят различни серологично активни компоненти.

Създаването на еритроцитни диагностикуми от стабилизирани еритроцити позволява да се преодолеят трудностите, възникващи при използването на нативни еритроцити.

При изследване на еритроцити, третирани с различни фиксатори, са установени някои от техните общи свойства:

По морфология те практически не се различават от пресните;

Не се хемолизира в хипотонични разтвори, във вода и след замразяване-размразяване;

Може да се изсуши чрез замразяване;

Техните повърхностни структури запазват способността си да бъдат химически модифицирани (напр. танин, диазо съединения) и да реагират с антигени и антитела.

Основният критерий за качеството на фиксираните еритроцити е възможността за тяхното използване за получаване на сенсибилизирани препарати при липса на неспецифична аглутинация в стабилизиращи течности.

Подготовката на повърхността на еритроцитите с цел повишаване на сорбционния капацитет за антигени е важна при проектирането на диагностични препарати. Особено разпространено е третирането на еритроцитите с танин.

Под негово влияние се променят антигенните свойства на еритроцитите (пропускливост, скорост на утаяване), повишава се устойчивостта им към хемолитичните ефекти на някои мастни киселини. Основното обаче се постига - танизираните еритроцити имат много по-висока сорбционна способност на протеини, което в момента се използва широко в производството на висококачествени антигенни и антитела диагностикуми.

Наред с танизирането на еритроцитите, за производството на еритроцитни диагностикуми и получаването на антигенен носител се използват химически реагенти като бромелаин, триопсин и калиев периодат, които също модифицират мембраните на еритроцитите.

След подготовката на повърхността на еритроцитите се извършва най-важният процес - процесът на хемосенсибилизация - последният етап в производството на еритроцитни диагностикуми.

За укрепване на връзката между носителя и антигена се използват различни конюгиращи вещества - бисдиазобензидин, дифлуородинитробензин, цианид хлорид, кадмиев хлорид и оцетна киселина, бромен хлорид, формалдехид, глутаралдехид, цианоген бромид, риванол, амидол и др.

Използването на конюгиращи вещества помага да се премахнат недостатъците, които имат танизираните еритроцити, използвани за сенсибилизация без конюгиращи вещества.

Най-широко използваните конюгиращи вещества са хромов хлорид, глутаралдехид, диазол черен С и амидол. Процесът на сенсибилизация с хромов хлорид протича много бързо - от 4 до 10 минути, което привлича вниманието на изследователите. В този случай се използват концентрации на хромен хлорид от 0,05 до 2%, рН не по-ниско от 5,0 при температура на реакционната смес от 20-250 С. В процеса на сенсибилизация с хромен хлорид, карбоксилните групи на протеините на еритроцитната мембрана са активирани. В резултат на това се образува ковалентна връзка между еритроцитната мембрана и сенситина.

Реакцията на непряка хемаглутинация има висока специфичност, тъй като аглутинацията на еритроцитите възниква в резултат на взаимодействието на антигена с антителата, адсорбирани върху еритроцитите. Неговата отличителна черта е високата чувствителност: в него се откриват 0,02-0,05 μg протеин на антитялото. По отношение на чувствителността, той значително надвишава реакциите на имунодифузия, имунофлуоресценция, радиална имунодифузия, фиксиране на комплемента и неутрализация. RNGA е по-малко чувствителен от методите на радиоимуноелектрофореза, определяне на количеството протеин на радиоактивни антитела в имуносорбента, ензимен имуноанализ.

Предимствата на RNGA включват достатъчно висока възпроизводимост, лекота на изпълнение и необходимостта от минимални количества съставки, особено при използване на микрометода.

През последните години RNHA намери широко приложение в диагностиката на инфекциозен ринотрахеит, диария, аденовирусна инфекция, рота- и коронавирусна инфекция, параинфлуенца-3 и респираторна синцитиална инфекция.

Даваме пример за производството и използването на еритроцитна диагностика за откриване на антитела срещу рота- и коронавирусни инфекции.

Методът за приготвяне на диагностикуми на антитела за откриване на рота- и коронавирусни антигени в RNGA е както следва: получаване на суспензия от еритроцити; фиксиране на техните акролеини; танизиране, което позволява получаване на стабилна сорбция на необходимия протеин върху еритроцитите; сенсибилизация на танизирани еритроцити с имуноглобулини; определяне на спецификата на изготвения диагностикум. Приготвянето на суспензия от еритроцити се извършва чрез вземане на кръв от клинично здрав овен в колба със стъклени перли. След дефибриниране на кръвта еритроцитите се промиват 3-5 пъти с изотоничен (0,9%) разтвор на натриев хлорид чрез центрофугиране за 15-20 минути при 400g.

За да се стабилизират червените кръвни клетки, те се третират с акролеин. Както знаете, действието му е малко по-меко от формалдехида и осигурява стабилност и по-висока активност на еритроцитите. За тази цел равни обеми от 10% суспензия от еритроцити се смесват с 0,2% разтвор на акролеин, приготвен във фосфатен буферен разтвор (PBS) с рН 7,2. Получената суспензия се държи 30 min при 37°C, като се разбърква добре, последвано от освобождаване на акролеин чрез многократно центрофугиране за 5 min при 600-800 g, докато специфичната миризма изчезне напълно. Предимството на така приготвените еритроцити е, че се събират за в бъдеще, могат да се съхраняват дълго време, без да се подлагат на хемолиза.

След това стабилизираните еритроцити в 10% концентрация се държат при 2-4 °C в PBS с рН 7,2 в продължение на два месеца.

За да се увеличи сорбционната способност и седиментацията на еритроцитите, е необходимо да се танизират чрез смесване на равни части от 10% суспензия от промити еритроцити и разтвор на танин в PBS и рН 7,2 при разреждане 1:30 000. Сместа се разбърква старателно и се държи при 370 С в продължение на 15 минути, след което еритроцитите се промиват старателно от танин два пъти в PBS с рН 7,2 и три пъти с изотоничен разтвор на натриев хлорид с рН 7,2-7,4.

Оптималното време за гарантиране на получаването на висококачествени еритроцитни диагностикуми е тяхната сенсибилизация в рамките на 24-48 часа след третирането им с танин.

В процеса на приготвяне на диагностикуми като разтворител и консервант се използва 0,3% фенолизиран изотоничен разтвор на натриев хлорид с 0,1% нормален заешки или конски серум, предварително инактивиран при 56°C за 30 минути и адсорбиран от нормални овчи еритроцити.37°C за 30 мин.

Сенсибилизирането на танизираните еритроцити трябва да се извършва с хиперимунен серум, съответно срещу говежди рота- и коронавируси (произведен от Всеруския изследователски институт по експериментална ветеринарна медицина Я. Р. Коваленко). В същото време сенсибилизиращата доза (концентрация на протеин) на антиротавирусния имунен серум е 280 μg/ml, а тази на имунния серум към коронавирус е 260 μg/ml.

Сенсибилизацията се извършва чрез смесване на равни обеми танизирани еритроцити и имунен серум, предварително загрят за 30 минути при 560C в оптимална концентрация. Освен това се добавят 3 части изотоничен разтвор на натриев хлорид с рН 7,2 и 5 части 0,1% разтвор на хромен хлорид. Сместа, като се разбърква от време на време, се оставя на стайна температура за 5 минути. След определеното време сместа се промива старателно с PBS с рН 7,2 и след това приготвените еритроцитни диагностикуми се ресуспендират в консервант до 1% концентрация. Приготвеният диагностикум запазва основните си качества 8 месеца, ако се съхранява при 4°C.

На всички етапи от производството на диагностикуми се наблюдава самоаглутинацията. Специфичността на подготвените диагностикуми се определя чрез поставяне на RNGA, където като антигени се използват стандартни диагностикуми на RTI вируси, PG-3, аденовируси, вирусна диария, както и рота- и коронавирусни антигени.

При настройване на RNHA се приготвят серийни двойни разреждания на изследвания вирус-съдържащ материал (20-50% суспензия от фекални проби), след което към всяка ямка се добавя равен обем еритроцитна диагностика. Плаките трябва да се разклатят старателно няколко пъти, да се оставят на стайна температура, докато еритроцитите се утаят напълно в контролата. Показател за положителна реакция е аглутинацията на еритроцитния диагностикум с интензитет на аглутинация 2+ в титър 1:4 и повече.

Реакция на индиректна или пасивна хемаглутинация (IPHA)

Тази реакция е по-чувствителна от реакцията на аглутинация и се използва при диагностицирането на инфекции, причинени от бактерии, рикетсии, протозои и други микроорганизми.

RPGA ви позволява да откриете малка концентрация на антитела.

Тази реакция включва дъбени овчи еритроцити или човешки еритроцити с I група кръв, сенсибилизирани с антигени или антитела.

Ако в тестовия серум се открият антитела, се използват еритроцити, сенсибилизирани с антигени (еритроцитна диагностика).

В някои случаи, ако е необходимо да се определят различни антигени в тестовия материал, се използват еритроцити, сенсибилизирани с имуноглобулини.

Резултатите от RPHA се вземат предвид от естеството на еритроцитната утайка.

За положителен се приема резултатът от реакцията, при който еритроцитите покриват равномерно цялото дъно на епруветката (обърнат чадър).

При отрицателна реакция еритроцитите под формата на малък диск (бутон) се намират в центъра на дъното на епруветката.

Реакция на аглутинация (RA)

Поради своята специфичност, лекота на настройка и демонстративност, реакцията на аглутинация е широко разпространена в микробиологичната практика за диагностика на много инфекциозни заболявания: коремен тиф и паратиф (реакция на Видал), тиф (реакция на Weigl) и др.

Реакцията на аглутинация се основава на спецификата на взаимодействието на антитела (аглутинини) с цели микробни или други клетки (аглутиногени). В резултат на това взаимодействие се образуват частици – агломерати, които се утаяват (аглутинират).

В реакцията на аглутинация могат да участват както живи, така и мъртви бактерии, спирохети, гъбички, протозои, рикетсии, както и еритроцити и други клетки.

Реакцията протича в две фази: първата (невидима) е специфична, свързването на антигена и антителата, втората (видима) е неспецифична, свързването на антигени, т.е. образуване на аглутинат.

Аглутинатът се образува, когато един активен център на двувалентно антитяло се комбинира с детерминантната група на антигена.

Реакцията на аглутинация, както всяка серологична реакция, протича в присъствието на електролити.

Външно проявата на положителна реакция на аглутинация е двойна. При микробите без камшик, които имат само соматичен О-антиген, самите микробни клетки се слепват директно. Такава аглутинация се нарича финозърнеста. Настъпва в рамките на 18 - 22 часа.

Камшичестите микроби имат два антигена - соматичния О-антиген и флагеларния Н-антиген. Ако клетките се слепват с флагели, се образуват големи хлабави люспи и такава реакция на аглутинация се нарича едрозърнеста. Пристига за 2-4 часа.

Реакцията на аглутинация може да се зададе както с цел качествено и количествено определяне на специфични антитела в кръвния серум на пациента, така и с цел определяне на вида на изолирания патоген. хемаглутинация микробиологичен инфекциозен

Реакцията на аглутинация може да бъде зададена както в подробна версия, която позволява работа със серум, разреден до диагностичен титър, така и във варианта на настройка на ориентировъчна реакция, която позволява по принцип да се открият специфични антитела или да се определи вида на патоген.

Реакцията се провежда за откриване на антигени на патогени в тестовия материал чрез добавяне на имунен серум към него. В присъствието на хомоложен антиген възниква свързване на антитела, следователно след добавяне на антиген-сенсибилизирани еритроцити не настъпва тяхната аглутинация, което се оценява като положителен резултат. За по-голяма чувствителност на реакцията към тестовия материал се добавя специфичен имунен серум в минимално количество (2 хемаглутиниращи единици). Титърът на имунния серум се определя предварително с помощта на RNGA. За една хемаглутинираща единица вземете ограничаващото разреждане на серума, което причинява аглутинация на еритроцитите.

Методика. 0,025 ml от 1% разтвор на нормален заешки серум се добавя към ямките на полистиролови плочи или аглутинационни епруветки и се правят серийни 2-кратни разреждания на тестовия материал. След това към всички ямки се добавят по 0,025 ml имунен серум, плаката се разклаща и се оставя за 30 минути при температура 37ºС или 1 час при стайна температура. Освен това към всички ямки се добавят 0,025 ml антигенен диагностикум, разклаща се и се оставя за 2 часа, след което резултатите се вземат предвид.

При провеждане на тази реакция към контрола за RNGA се добавя специфичен контрол на имунния серум, състоящ се от специфичен антиген, имунен серум (2, 1, 0,5 хемаглутиниращи единици) и суспензия от сенсибилизирани еритроцити.

RTNGA се използва и за откриване на специфични антитела (пълни и блокиращи), за които към тестовия серум се добавя дозирано количество антиген. Ако съдържа антитела, тогава те са свързани с антиген, следователно след добавяне на еритроцити, сенсибилизирани с антитела (2-ри етап на RTNHA), еритроцитите не се слепват.

Поради използването на минимално количество антиген (2 неутрализиращи дози), реакцията е силно чувствителна. Броят на неутрализиращите дози в антигенния препарат се определя с помощта на RNGA, докато се правят серийни 2-кратни разреждания на антигена в 1% разтвор на нормален заешки серум и към ямките се добавя антитяло еритроцитна диагностика. Неутрализиращата доза на антигена е максималното му разреждане, което осигурява пълно залепване на сенсибилизирани еритроцити.

Преди реакцията тестовите серуми се разреждат 1:5-1:10 и се инактивират при температура 56°C за 30 минути. За адсорбция на хемаглутинините към серума се добавя 50% суспензия от формализирани или прясно измити еритроцити от овен при скорост 0,1 ml от суспензията на 1 ml разреден серум. Сместа се разклаща и се инкубира 30 минути при 37°С или 1 час при стайна температура, след което еритроцитите се утаяват чрез центрофугиране. Можете да оставите серума в хладилник до следващия ден за утаяване на еритроцитите.

По време на експеримента тестовият материал се разрежда в 1% разтвор на нормален заешки серум в обем от 0,025 ml в ямките на микротитърния панел. След това към всяка ямка се добавят 2 неутрализиращи дози антиген в обем от 0,025 ml. Плаките се разклащат и се оставят за 30 минути при 37°С или 1 час при стайна температура. След това към всички ямки се добавят 0,025 ml антитяло еритроцитен диагностикум. Плаките се разклащат и се инкубират в продължение на 1,5-2 часа при стайна температура, след което се вземат предвид резултатите от реакцията. Счетоводството може да се направи и на следващия ден. Титърът на изследвания серум се счита за неговото максимално разреждане, при което еритроцитите не се слепват.

Опитът е придружен от следните видове контрол:

1) стабилност на сенсибилизирани еритроцити (еритроцити + 1% разтвор на нормален заешки серум);

2) пълно изчерпване на хемаглутинините във всеки тестов серум (тестов серум в най-малкото разреждане + формалинизирани еритроцити);

3) правилността на определяне на минималната неутрализираща доза на антигена (2, 1 и 0,5 от неутрализиращата доза на антигена + антитяло еритроцитна диагностика).

Обратната индиректна хемаглутинация (ронг) се използва за индикация на бактериални и вирусни антигени в тестови материали, както и за експресна диагностика на редица инфекции.

За разлика от RNHA, при тази реакция еритроцитите не се сенсибилизират от антиген, а от антитела, чиято аглутинация настъпва при добавяне на антигена.

Еритроцитите се фиксират предварително с формалин или глутаралдехид и след това се свързват с гама-глобулин, който се изолира от имунни серуми и се пречиства от други серумни протеини. Свързването на гама-глобулин с повърхността на еритроцитите става с помощта на хромов хлорид. За да направите това, 1 обем имуноглобулини, изолирани от имунен серум, 1 обем 50% суспензия от формализирани еритроцити и 1 обем 0,1-0,2% разтвор на хромен хлорид се добавят към 8 обема дестилирана вода. Сместа се оставя за 10-15 минути при стайна температура, след което еритроцитите се третират като при реакция на пасивна хемаглутинация.

Специфичността на диагностикума на антитялото се проверява в реакцията на инхибиране на пасивната хемаглутинация с хомоложен антиген. Реакцията трябва да бъде инхибирана от хомоложен антиген поне 16 пъти и да не бъде инхибирана от хетероложен. Използвайте контрола за липса на спонтанна хемаглутинация.

С помощта на тази реакция се индикират патогени в материала, взет от органите на мъртви хора и животни, например от мозъка, далака, черния дроб на белите дробове. Пригответе 10% суспензия от тези органи в изотоничен разтвор на натриев хлорид, центрофугирайте ги за 30-60 минути при 10 000 rpm и използвайте супернатантата като антиген.

Методика.Пригответе 2-кратни разреждания на тестовия материал (антиген) в стабилизиращ разтвор. Направете 1 капка от всяко разреждане на антиген в 3 съседни ямки на микрочипа (реакцията отнема 3 успоредни реда ямки). 1 капка стабилизиращ разтвор се добавя към всяка ямка от първия ред, 1 капка хомоложен имунен серум в разреждане 1: 10 се добавя към ямките от втория ред, 1 капка хетероложен имунен серум се добавя към ямките на третият ред. Вторият и третият ред служат като контроли за специфичността на реакцията. Сместа се оставя за 20 минути на стайна температура.

Добавете 1 капка 1% суспензия от сенсибилизирани еритроцити (диагностикум на еритроцитни антитела) към всички ямки и разклатете плочките старателно. Резултатите от реакцията се отчитат след 30-40 минути. В присъствието на специфичен антиген, хемаглутинацията се отбелязва в първия и третия ред (с хетероложен серум) и липсва във втория ред, където антигенът е предварително неутрализиран с хомоложен серум.

Реакцията се придружава от контроли на сенсибилизирани еритроцити за спонтанна аглутинация.

Реакция на обратно индиректно инхибиране на хемаглутинацията (RTONGA)ви позволява да определите наличието на антитела в серума на хора и животни.

Методика. Серумите се разреждат 10 пъти с изотоничен разтвор на натриев хлорид, загряват се в продължение на 20 минути при температура 65 ° C, за да се унищожат неспецифичните инхибитори, след което се приготвят 2-кратни разреждания на серуми в стабилизиращ разтвор и работна доза антиген, съдържащ 4 аглутиниращи единици. Направете по 1 капка от всяко разреждане на серума в ямките на микропанела и към тях добавете по 1 капка антиген, чието разреждане съответства на работната доза. След като компонентите на сместа са били в контакт в продължение на 20 минути при стайна температура, към всички ямки се добавя по 1 капка еритроцитен антитяло диагностикум и се разклаща добре. След 1,5-2 часа инкубация при стайна температура резултатите от реакцията се вземат предвид чрез хемаглутинация. Серумният титър е неговото най-високо разреждане, което напълно инхибира реакцията на хемаглутинация с четири антигенни аглутиниращи единици.

Реакцията се придружава от контроли на сенсибилизирани еритроцити за спонтанна аглутинация в присъствието на: а) стабилизиращ разтвор; б) нормален антиген (от материал, който не съдържа вирус); в) тест серум. Предимството на реакцията е в нейната универсалност и възможността да се използва за откриване на различни антигени.

Оценка на резултатите от хемаглутинацията. Резултатите от RNGA, RONGA и RTONGA се вземат предвид според степента на аглутинация на еритроцитите: (++++) - пълна аглутинация; (+++) - по-малко пълна аглутинация; (++) - частична аглутинация; (+) - следи от аглутинация; (–) – липса на аглутинация.

Реакцията се счита за положителна, ако аглутинацията е пълна (++++) или почти пълна (+++), диагностикумът не аглутинира спонтанно в присъствието на всеки компонент на реакцията и контролът на специфичността на антиген или антитяло е положителен .

Тези реакцииНаречен непряк (пасивен), тъй като те използват Ag (или AT), изкуствено сорбиран върху повърхността на различни корпускулярни частици.

Реакцията на индиректна или пасивна хемаглутинация (RNGA, RPGA) е една от най-чувствителните серологични реакции. Тя се основава на способността на AT да взаимодейства с Ag, фиксиран върху различни еритроцити, които в същото време аглутинират. За по-голяма стабилност на диагностикумите еритроцитите се формализират.

Обратен RNGAизползва се за откриване на антиген в кръвен серум; за това не Ag, а AT се фиксират върху еритроцитите. Реакциите от този тип се използват широко за диагностициране на инфекциозни заболявания, установяване на бременност, откриване на свръхчувствителност към лекарства и др.

Реакция на инхибиране на пасивна хемаглутинация (RTPGA) - по-нататъчно развитие RNGA; в известен смисъл контролира неговата специфика. За разлика от RNGA, включва три компонента; Ag, AT и Ag (AT), адсорбирани върху еритроцитите. Първоначално Ag реагира с AT (стандартен антисерум), след което към сместа се добавят еритроцити, сенсибилизирани със същия Ag (или AT). Ако по време на взаимодействието на Ag с AT свободният AT (или Ag) не остане в системата, тогава не се наблюдава аглутинация на еритроцитния диагностикум.