Схема определения групп крови. Определение группы крови у взрослых и детей: методы

Определение группы крови по стандартным сывороткам используется часто (по сравнению с другими методиками). В основе данной техники — содержащиеся в крови агглютинины и агглютиногены в различных комбинациях.

Соединение одноименных агглютиногена и агглютинина сопровождается реакцией агглютинации (однородное пятно распадается на многочисленные мелкие пятна, состоящие из эритроцитов, склеившихся между собой).

Суть метода

При оказании медицинской помощи не всегда удается быстро остановить кровотечение, для переливания требуется определение группы крови, резус-фактора.

Существуют 2 эритроцитных антигена (агглютиногены А и В) и 2 антитела (а и b). Различные комбинации антигенов и антител образуют 4 группы крови.

Данный способ имеет преимущества, т. к. позволяет свести к одному многочисленные измерения.

Методика определения показателей

Определение групп крови по стандартным сывороткам проводится с использованием реактивов, содержащих агглютинины разных групп, вступающих в реакцию с агглютиногенами, находящимися на поверхности эритроцитов.

Чтобы выявить группу крови, достаточно воспользоваться стандартными сыворотками лишь II и III групп. Однако для исключения возможных ошибок с целью дополнительного контроля используют и остальные (I и IV групп).

Изготовление сыворотки

Стандартные сыворотки для определения группы крови получают из донорской крови. С этой целью используют специальную систему: выделяют плазму вместе с находящимися в ней антителами, затем ее разводят изотоническим раствором хлорида натрия.

Помещают 1 мл раствора NaCl 0,9% в пробирку, добавляют плазму (1 мл), взбалтывают состав. Берут 1 мл полученной смеси, переносят в другую пробирку с изотоническим раствором.

Манипуляцию повторяют, пока не получат разведение смеси в пропорции 1:256. Другие разведения не используют, чтобы исключить возникновение ошибки.

Для одного исследования с помощью стандартных сывороток их требуется 3 (2 серий для каждой группы), отличающихся по цвету:

• I (0) — прозрачная жидкость, флакон снабжен белой этикеткой;
• II (А) — жидкость голубая, флакон с 2 полосами синего цвета;
• III (В) — бледно-розовая жидкость, флакон с 3 розовыми полосками;
• IV(АВ) — желтая жидкость, на этикетке флакона 4 желтые полоски.

На этикетках указаны:

• титр;
• срок годности;
• дата выпуска;
• серийный номер.
• данные об изготовителе.

Проведение исследования

Температура в помещении должна быть в пределах +15…+ 25°С, требуется хорошее освещение.

Используют специальный планшет, имеющий области с пометками. На него наносят каждую сыворотку (берут 2 образца, 1 из них — контрольный, 2 — для диагностики).

Затем рядом с каждой каплей сыворотки размещают каплю крови, смешивая с каждым в отдельности реагирующим раствором. Спустя несколько минут (5-6) анализируют полученные данные:

• если происходит реакция агглютинации — сывороточный тест считается положительным;
• при отсутствии агглютинации тест отрицательный.

Результаты исследования

В случае положительного результата эритроциты склеиваются (в реагирующем растворе образуются красные сгустки).

Если цвет раствора не изменился, реакция считается отрицательной. Есть закономерности, зависящие от комбинаций отрицательных и положительных реакций, происходящих в растворах:

• I(0), если ни в одном образце нет положительной реакции;
• II (А), если в образце II (А) состояние не изменилось, а в 2 остальных оказалась положительная реакция;
• III(В), если только в образце III(В) реакция оказалась отрицательной;
• IV(АВ), если в каждом из 3 образцов реакция оказалась положительной.

Появление других комбинаций связано с погрешностями, возникающими при исследовании.

Использование старых реактивов или неправильное проведение анализа может сопровождаться слабой реакцией. В таких случаях с целью уточнения необходимо сделать тесты с использованием других методик.

Вконтакте

Группа крови – это оригинальные антигенные характеристики клеток крови (эритроцитов), которые определяются с использованием способов распознания групп белков и углеводов, содержащихся в оболочке эритроцитов. Определить группу крови – обязанность каждого человека, для этого необходимо сдать анализ. На сегодняшний день в любой больнице или поликлинике можно сдавать свою кровь на исследование, поэтому трудностей с проведением данной процедуры не возникает, и каждому важно знать, как определить группу крови и откуда берут материал на исследование.

Группа крови в течение всей жизни у каждого человека остается неизменной. Люди с одним типом могут отличаться от людей с другим по причине того, что у каждого человека разное количество агглютиногенов A и B в кровяных клетках, а также совсем разное количество агглютининов α и β, которые содержатся уже в амбоцептере крови.

В природе существует несколько видов групп крови:

• 0(I) – эта содержит только агглютинины α и β, агглютиногенов нет.
• A(II) – содержится только агглютинин β и агглютиноген A.
• В(III) – агглютинин α и агглютиноген B.
• AB(IV) группа крови - содержит агглютиногены A и B, агглютинины отсутствуют.

Откуда появилась классификация? Впервые открыл все существующие типы крови у людей врач из Австрии. Это открытие позволило ученому получить премию А.Нобеля по медицине в 1930 году. Также открытие групп помогло остановить смертельные исходы в процессе от одного человека другому . Человек, которому необходимо сделать переливание называется реципиентом. Человек же, что сдает свою кровь, называется донором. Наиболее подходящим типом для реципиента будет кровь идентичная его типу.

Помимо существующих антиглютиногенов A и B в кровяных клетках можно наблюдать и другие антигены, например, резус-факторы. В ситуации, если кровь не совместима по резус-фактору, то проводить переливание категорически запрещено. Впоследствии могут возникнуть плачевные случаи, вплоть до летального исхода.

Проведение исследования

Как узнать группу крови, откуда ее берут для исследования? Эти вопросы интересуют всех заинтересованных людей. Для этого можно обратиться в лечебное учреждение, где нужно сдать биологическую жидкость из пальца. Анализ на группу крови можно проводить тремя основными способами:

• по изогемагглютиновым сывороткам;
• по изогемагглютиновым сывороткам и стандар­тным клеткам крови (перекрёстный способ);
• метод с применением МКА (цоликлоны анти-A и анти-B).

Обычно в лабораториях переливания крови проводят исследование по первому способу, т.е. с применением стандартных изогемагглютиновых сывороток. Процесс заключается в том, что тест проводится на обнаружение антиглютиногенов A и B в освещенной лаборатории с температурой воздуха в пределах 15-25 °C. Для этого берут исследуемый материал и на специально подготовленную тарелку или пластину наносят стандартные изогемагглютинирующие сыворот­ки I, II, III групп в объеме 0,1 мл.

Чтобы избежать возникновения каких-либо неточностей, наносят две серии сывороток каждого из типов. Должно получиться 6 капель. Эти 6 ка­пелек образца анализируемой биожидкости переносят на специальную пластину в другие 6 точек, при этом каждую каплю размещают рядом с (крови понадобится в 10 раз меньше, чем используемое количество сыворотки), после этого их аккуратно смешивают уже другими палочками со слегка закругленными краями. Во время смешивания пластину аккуратно покачивают из стороны в сторону. Склеивание клеток происходит в течение 30 секунд. В те капли биологической жидкости, где прошло соединение, добавляется немного изотонного раствора хлорида натрия, и оценивается результат теста.

Вторым тестом на группу является перекрёстный метод. Его чаще применяют в серологических лабораториях. Перекрестный метод заключается в том, что сдавать биологический материал нужно на определение содержания антиглютиногенов A и B с применением стандартных изогемагглютиновых сывороток и антител α и β при помощи эритроцитов. Для этого на специальную тарелку белого цвета наносят маркером 6 клеток, в которые капают пипеткой по 1 капле сыворотки из анализируемой биожидкости, а рядом располагают по маленькой капле эритроцитов определенных групп 0(I), A(II), B(III) – по два раза.

Отличительной и главной особенностью этого метода является то, что эритроциты группы 0(I) главные, т.к. они не содержат антигенов. Эта особенность делает невозможным соединение эритроцитов с любой из сывороток.

В третьем тесте на выявление применяют МКА. Используется гибридомная биотехнология. Гибридома представляет собой гибрид клеток, полученных из миеломы и иммунного лимфоцита, что производит МКА. К моноклональным антителам (МКА) относят: цоликлоны анти-A и цоликлоны анти-B. Их наносят на приготовленную пластину белого цвета по 1 большой капле под специальными надписями анти-A и анти-B. После, рядом с каплями антител размещают по маленькой капле анализируемой биожидкости. Агглютинация происходит в последующие 2–3 минуты.

Погрешности при проведении исследования

Определение группы крови описанными тестами может осложниться появлением некоторых характерных ошибок. Все возможные ошибки можно классифицировать на три группы: технические, биологические и сывороточные.

К техническим ошибкам относятся поспешная оценка результатов, несоблюдение режима нужной температуры, отсутствие маркировки платин, неверное соотношение количества крови и сыворотки. Биологические ошибки появляются в тех случаях, когда красные кровяные тельца соединились со всеми сыворотками, на исследование берут инфицированную биожидкость, происходит полная панагглютинация, неактивные антигены A и B. Сывороточные ошибки могут быть, если берут инфицированную, просроченную или сыворотку с титром ниже 32.

Во избежание указанных погрешностей нужно соблюдать строгие правила при проведении тестов на установление своей группы . Следует использовать разные тарелки (чистые и сухие), категорически нельзя смешивать компоненты одной и той же палочкой, следить за сроками и температурой, ну и конечно, процедура определения группы крови не должна проходить в домашних условиях, а только в медицинском учреждении специалистами.

Таким образом, только исследования в лабораторных условиях помогут ответить на главный вопрос, как узнать группу крови. И никакая иная информация или советы других людей не позволят узнать свою группу, особенно в домашних условиях. Поэтому для тех, кто задается вопросом, какая у меня группа крови, для проведения правильного исследования с точными результатами необходимо специальное оборудованное помещение, где будут соблюдаться все требования, а не домашние условия с использованием подручных предметов.

Материалы публикуются для ознакомления, и не являются предписанием к лечению! Рекомендуем обратиться к врачу-гематологу в вашем лечебном учреждении!

Группа крови и резус-фактор — особые белки, которые определяют ее индивидуальный характер, так же, как цвет глаз или волос у человека. Группа и резус имеют большое значение в медицине при лечении кровопотерь, болезней крови, а также влияют на формирование организма, функционирование органов и даже психологические особенности человека.

Понятие о группе крови

Еще врачи древности пытались восполнять кровопотерю путем переливания крови от человека человеку и даже от животных. Как правило, все эти попытки имели печальный исход. И только в начале ХХ века австрийским ученым Карлом Ландштейнером были обнаружены различия в группах крови у людей, которые представляли собой особые белки в эритроцитах — агглютиногены, то есть вызывающие реакцию агглютинации — склеивание эритроцитов. Она-то и являлась причиной гибели больных после переливания крови.

Установлено 2 основных вида агглютиногенов, которые были условно названы А и В. Склеивание эритроцитов, то есть несовместимость крови, происходит в случае, если агглютиноген соединяется с одноименным белком — агглютинином, содержащимся в плазме крови, соответственно, а и b. Значит, в крови человека не может быть одноименных белков, вызывающих склеивание эритроцитов, то есть если есть агглютиноген А, то в ней не может быть агглютинина а.

Обнаружено также, что в крови могут быть оба агглютиногена — А и В, но тогда она не содержит ни одного вида агглютининов, и наоборот. Все это и есть признаки, определяющие группу крови. Поэтому при соединении одноименных белков эритроцитов и плазмы развивается конфликт по группе крови.

Виды групп крови

На основании этого открытия у людей выделено 4 основных вида группы крови:

• 1-я, не содержащая агглютиногенов, но содержащая оба агглютинина а и b, это — самая распространенная группа крови, которой обладают 45% населения планеты;
• 2-я, содержащая агглютиноген А и агглютинин b, определяется у 35% людей;
• 3-я, в которой есть агглютиноген В и агглютинин а, ее имеют 13% людей;
• 4-я, содержащая оба агглютиногена А и В, и не содержащая агглютининов, такая группа крови самая редкая, она определяется лишь у 7% населения.

В России принято обозначение групповой принадлежности крови по системе АВ0, то есть по содержанию в ней агглютиногенов. В соответствии с этим таблица групп крови выглядит следующим образом:

Групповая принадлежность крови передается по наследству. Может ли поменяться группа крови — на этот вопрос ответ однозначен: не может. Хотя истории медицины известен единственный случай, связанный с генными мутациями. Ген, определяющий группу крови, находится в 9-й паре хромосомного набора человека.

Важно! Суждение о том, какая группа крови подходит всем, сегодня утратило актуальность, так же, как и понятие универсального донора, то есть обладателя 1-й (нулевой) группы крови. Открыто множество подвидов групп крови, и переливается только одногруппная кровь.

Резус-фактор: отрицательный и положительный

Несмотря на открытие Ландштейнером групп крови, все же продолжали иметь место трансфузионные реакции во время переливания. Ученый продолжал свои исследования, и совместно со своими коллегами Винером и Левайном ему удалось обнаружить еще один специфический белок-антиген эритроцитов — резус-фактор. Вначале он был выявлен у человекообразной обезьяны макаки-резус, откуда и получил свое название. Оказалось, что резус присутствует и в крови большинства людей: у 85% населения этот антиген имеется, а у 15% он отсутствует, то есть у них отрицательный резус-фактор.

Особенность резус-антигена состоит в том, что при попадании в кровь людей, его не имеющих, он способствует выработке антирезус-антител. При повторном контакте с резус-фактором эти антитела дают тяжелую гемолитическую реакцию, которая называется резус-конфликтом.

Важно! Когда резус-фактор отрицательный — это значит не просто отсутствие в эритроцитах резус-антигена. В крови могут присутствовать антирезусные антитела, которые могли образоваться во время контакта с резус-положительной кровью. Поэтому обязателен анализ на наличие резус-антител.

Определение группы крови и резус-фактора

Группа крови и резус-фактор подлежат обязательному определению в следующих случаях:

• для проведения переливания крови;
• для пересадки костного мозга;
• перед любой операцией;
• при беременности;
• при заболеваниях крови;
• у новорожденных при гемолитической желтухе (резус-несовместимости с матерью).

Однако в идеале сведения о групповой и резус-принадлежности должны быть у каждого человека — как у взрослого, так и у ребенка. Никогда нельзя исключить случаи тяжелой травмы или острого заболевания, когда может срочно понадобиться кровь.

Определение группы крови

Определение группы крови проводится специально полученными моноклональными антителами по системе АВ0, то есть агглютининами сыворотки, которые дают склеивание эритроцитов при контакте с одноименными агглютиногенами.

Алгоритм определения группы крови следующий:

1. Подготавливают цоликлоны (моноклональные антитела) анти-А — ампулы розового цвета, и анти-В — ампулы синего цвета. Подготавливают 2 чистых пипетки, стеклянные палочки для смешивания и предметные стекла, одноразовый шприц на 5 мл для взятия крови, пробирку.
2. Выполняют забор крови из вены.
3. На предметное стекло или специальный маркированный планшет наносят по большой капле цоликлонов (0,1 мл), к ним подмешивают отдельными стеклянными палочками маленькие капли исследуемой крови (0,01 мл).
4. Наблюдают за результатом 3-5 минут. Капля с примешанной кровью может быть гомогенной — реакция минус (-), или выпадают хлопья — реакция плюс или агглютинация (+). Оценка результатов обязательно проводится врачом. Варианты исследования определения группы крови представлены в таблице:

Определение резус-фактора

Определение резус-фактора выполняется аналогично определению группы крови, то есть с помощью моноклонального антитела сыворотки к резус-антигену. На специальную чистую белую керамическую поверхность наносят большую каплю реагента (цоликлона) и малую каплю только что взятой крови, в таких же пропорциях (10:1). Кровь осторожно смешивают стеклянной палочкой с реагентом.

Определение резус фактора цоликлонами занимает меньше времени, потому что реакция наступает уже через 10-15 секунд. Однако необходимо выдержать максимальный срок — 3 минуты. Так же, как и в случае определения группы крови, пробирку с кровью направляют в лабораторию.

В медицинской практике сегодня широко применяют удобный и быстрый экспресс-метод определения групповой принадлежности и резус-фактора с помощью сухих цоликлонов, которые разводятся стерильной водой для инъекций непосредственно перед исследованием. Метод называется «Эритротест-группокарт», он очень удобен как в условиях клиник, так и в экстремальных, и в полевых условиях.

Характер и здоровье человека по группе крови

Кровь человека как его специфический генетический признак еще до конца не изучена. В последние годы учеными открыты варианты подгрупп крови, разрабатываются новые технологии определения совместимости и так далее.

Крови также приписывается свойство влиять на здоровье и характер ее владельца. И хотя этот вопрос остается спорным, все же многолетними наблюдениями подмечены интересные факты. Например, японские исследователи считают, что можно определить характер человека по группе крови:

• обладатели 1-й группы крови — люди волевые, сильные, общительные и эмоциональные;
• обладатели 2-й группы отличаются терпеливостью, скрупулезностью, упорством, трудолюбием;
• представители 3-й группы являются творческими личностями, но в то же время слишком впечатлительны, властны и капризны;
• люди с 4-й группой крови живут больше чувствами, отличаются нерешительностью, порой неоправданно резки.

Что касается здоровья в зависимости от группы крови, то считается, что оно является наиболее крепким у большинства населения, то есть при 1-й группе. Лица со 2-й группой склонны к болезням сердца и онкологическим заболеваниям, для обладателей 3-й группы характерен слабый иммунитет, низкая устойчивость к инфекциям и стрессам, а представители 4-й группы склонны к сердечно-сосудистой патологии, заболеваниям суставов, раку.

Определение групповой принадлежности крови по системе АВО осуществляется при помощи реакции агглютинации. В настоящее время применяется три способа определения групп крови по системе АВО:

По стандартным изогемагглютинирующим сывороткам,

По стандартным изогемагглютинирующим сывороткам и стан­дартным эритроцитам (перекрестный способ),

С помощью моноклональных антител (цоликлонов анти-А и анти-В).

Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки

Стандартные изогемагглютинирующие сыворотки, используемые для определения группы крови, соответствуют четырем группам крови 0 (І), А (II), В (III), АВ (IV). Их получают из крови, реже из других жидкостей (асцитической, плеврального экссудата). Используется кровь от доноров, трупная или плацентарная кровь. Кровь отстаивается и забирается сыворотка, к которой добавляется консервант (борная ки­слота из расчета 3,0 г порошка на 100 мл сыворотки). После отстаива­ния сыворотка разливается по стерильным ампулам или флаконам, ко­торые сразу же запаиваются или герметично закупориваются.

Требования, предъявляемые к стандартным изогемагглютини­рующим сывороткам:

1. агглютинация с соответствующими эритроцитами должна появиться в течение 15-20 с. а через 2 мин. она должна быть четкой;

2. не давать агглютинацию с эритроцитами одноименной и пер­вой групп:

3. титр сыворотки должен быть не ниже 1: 32;

4. сыворотка должна быть без признаков микробного загрязне­ния, прозрачной;

5. каждая ампула должка иметь паспорт с обозначением груп­пы, срока годности, титра, места и времени приготовления, нанесены соответствующего цвета полосы.

Во избежание ошибок при определении групп крови сыворотки окрашивают в определенный цвет. Окраска стандартных изогемагг­лютинирующих сывороток: 0(1)- не окрашивается, А(II) - синий цвет, В(III) - розовый, AB(IV)- желтый. Сыворотки хранят герметично за­крытыми, в темном месте, лучше в холодильнике.

Понятие о титре

Реакция агглютинации с различными сыворотками и эритроци­тами может в одних случаях наступить довольно быстро и быть четко выражена, в других она менее выражена и возникает более медленно. Иногда агглютинация и при большом разведении сыворотки четко выявляется, в других случаях даже слабое разведение приводит к не проявлению её. Все это обусловлено тем, что чувствительность эрит­роцитов и сыворотки подвержена значительным колебаниям. Под титром агглютинации понимается максимальное разведение сыворот­ки, при котором еще может наступать реакция агглютинации. При оп­ределении титра сыворотки, постоянной величиной являются стан­дартные эритроциты; при определении титра эритроцитов, постоян­ной величиной является стандартная сыворотка. Титр понятие относи­тельное, так как титр эритроцитов точно устанавливается только по отношению к испытуемой сыворотке, а титр сыворотки только к ис­пытуемым эритроцитам. К другим эритроцитам он может быть дру­гой, но колебания его обычно бывают небольшими. Однако целый ряд эритроцитов обладает одинаковой чувствительностью, также как и ряд сывороток имеет одинаковый титр. Титр зависит и от метода оп­ределения. При определении капельным методом на тарелке у здоро­вых людей титр сыворотки колеблется в пределах 1:8-1:32. Если титр определяется в пробирках, он получается значительно выше.

Практическое значение имеет тот факт, что титр агглютининов новорожденных крайне низкий, а по мере развития человека он по­вышается; достигая максимума в возрасте от 5 до 20 лет, дальше он начинает падать. Титр агглютиногенов может меняться при заболева­ниях. Повышение его отмечается при ряде воспалительных процессов, резкое снижение бывает при тяжелой общей инфекции. Слабый титр сыворотки отмечен при лейкемии. У здоровых же людей титр сыво­ротки остается почти неизменным.

Зависимость реакции агглютинации от физико-химических условий

На ход агглютинации может оказывать влияние целый ряд фи­зических и химических факторов.

Температура. При низкой температуре происходит неспецифи­ческая "холодовая агглютинация". Для неё характерно возникновение агглютинации вне зависимости от группы крови. "Холодовая агглю­тинация" обусловлена наличием в сыворотке особого холодового агг­лютинина, который может давать реакцию агглютинации только при низких температурах. При температуре выше 20°С он никогда агглю­тинации не дает. Поэтому несоблюдение температурного режима при определении группы крови может привести к ошибке.

Химические Факторы. Течение агглютинации зависит от степе­ни концентрации солевого раствора, в котором находятся эритроциты. Повышение его концентрации приводит к её ослаблению, а при со­держании 4, 25 % во взвеси эритроцитов агглютинация уже не насту­пает. Ускорение агглютинации наблюдается при добавлении 10 % раствора лимоннокислого натрия.

Феномен Томсена. Агглютинация, возникающая при взаимодей­ствии одноименных агглютиногенов и агглютининов, является специ­фической. Неспецифическая агглютинация может быть обусловлена рядом факторов. Одним из видов такой агглютинации является фено­мен Томсена, описанный в 1927 г. Суть этого феномена заключается в следующем: нестерильно взятые и отмытые эритроциты, независимо от их групповой принадлежности, простояв в течение суток при ком­натной температуре, начинают давать агглютинацию с сыворотками всех групп, включая собственную. Причина возникновения феномена Томсена - бактериальное загрязнение крови. При микроскопическом исследовании такой агглютинации видно, что эритроциты лежат близко один к другому, а между ними заметны границы, чего нет при истинной агглютинации. Макроскопически агглютинацию при этом феномене нельзя отличить от истинной. Поэтому можно неправильно определить групповую принадлежность крови, все эритроциты будут трактоваться как принадлежащие к группе (AB)1V.

Панагглютинация (аутоагглютинация). Явление неспецифической агглютинации может наблюдаться и в свежей бактериально не загрязненном крови, Встречается она сравнительно редко и называет­ся панагглютинацией, или аутоагглютинацией. При этом виде агглю­тинации сыворотка при комнатной температуре дает агглютинацию со всеми эритроцитами, даже собственной группы, а эритроциты в то же время дают агглютинацию со всеми сыворотками, в том числе с сыво­роткой группы (AB)IV. Панагглютинация может возникать при целом ряде заболеваний (болезнях крови, септикопиемии, заболеваниях гепатолиенальной системы, пневмонии, нефритах и т. д.), иногда выяв­ляется и у здоровых людей. Панагглютинация возникает только при комнатной температуре, при температуре, близкой к температуре те­ла, она обычно не наступает. До настоящего времени причина этого явления неизвестна. Макроскопически панагглютинация неотличима от специфической агглютинации.

Псевдоагглютинация. Явление псевдоагглютинации обусловле­но склеиванием эритроцитов в монетные столбики независимо от их агглютинабельных свойств. При этом они не разрушаются, мембраны сохраняются, что четко видно под микроскопом. При добавлении 1-2 капель изотонического раствора хлорида натрия псевдоагглютинация исчезает.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГРУПП КРОВИ ПО СТАНДАРТНЫМ ИЗОГЕМАГГЛЮТИНИРУЮЩИМ СЫВОРОТКАМ (ПРОСТОЙ МЕТОД)

В повседневной клинической практике наиболее часто применя­ется определение групп крови по стандартным изогемагглютинирую­щим сывороткам. Суть метода-с помощью стандартных изогемагглю­тинирующих сывороток определяется наличие в исследуемой крови групповых антигенов А и В.

Материальное оснащение: стандартные сыворотки 0(1), А(II), В(III), AB(1V) групп двух серий, изотонический раствор хлорида на­трия, иглы, тарелки, стеклянные палочки или предметные стекла, пи­петки, песочные часы, резиновые перчатки, маска, очки, клеенчатый передник. Для определения группы крови используют блюдцеобраз­ные пластины (тарелки) с лунками, над которыми имеются обозначе­ния соответственно стандартным сывороткам.

Методика выполнения:

Определение группы крови производится при температуре не ниже +15° С и не выше +25° С.

2. Осмотреть стандартные гемагглютинируюшие сыворотки, чтобы они не содержали осадка, не был просрочен срок год­ности, были правильно расположены по отношению друг к другу.

3. На пластинке (тарелке) написать фамилию больного.

4. Согласно обозначениям групп крови на тарелке, в каждую лунку нанести отдельной пипеткой по одной капле стандарт­ной сыворотки - первой, второй и третьей группы двух серий образуя два ряда по три капли в каждом.

5. Взять кровь. Кровь для исследования берется из пальца или вены. При взятии крови из пальца в левую руку взять левую кисть больного, обработать спиртом дистальную фалангу IV пальца и проколоть стерильной иглой, при этом первую кап­лю крови удалить.

6. Шесть капель крови перенести стеклянной палочкой на тарелку, размещая их рядом с каплей стандартной сыворотки. Можно на тарелку нанести одну большую каплю крови, а за­тем уголком предметного стекла перенести в капли сыворот­ки. Каждый раз кровь берут новым уголком стекла. Соотно­шение исследуемой крови и стандартной сыворотки должно быть 1:10.

7. Место укола пальца обработать спиртом.

8. Каждую каплю крови и сыворотки на пластинке смешать от­дельной палочкой.

9. Пластинку осторожно покачивать в течение 5 минут, посто­янно обращая внимание на лунки, где может наступить агглютинация (склеивание эритроцитов). По мере наступления агг­лютинации, но не раньше чем через три минуты в капли на пластинке (тарелке) добавить по одной капле изотонического раствора хлорида натрия.

10. Реакция агглютинации может быть положительной или отри­цательной.

Агглютинация наступает обычно в течение первых 10-30 се­кунд. Визуально в капле появляются мелкие красные зернышки (агг- лютинаты), которые состоят из эритроцитов.

Мелкие агглютинаты сливаются в более крупные. Сыворотка обычно частично обесцвечи­вается. Если агглютинация не происходит сыворотка остается окра­шенной в красный цвет, агглютинатов в ней нет. Следует помнить, что кровь, содержащая агглютиноген А 2 дает позднюю агглютинацию (на 3-4 минуте).

Результаты исследования в одной и той же группе двух серий должны совпадать.

Оценка результатов

1. Стандартные сыворотки трех групп не вызывают агглютина­ции эритроцитов во всех лунках - группа крови О (I) первая;

2. Стандартные сыворотки О (I) и В (III) группы агглютиниро­вали эритроциты в первой и третьей лунках, а не агглютинировали во второй - группа крови А (II) вторая;

3. Наличии агглютинации в первой и второй лунках и отсутствии в третьей - группа В (III) третья;

4. Стандартные сыворотки всех трех групп агглютинировали эритроциты во всех лунках - данная кровь относится к четвертой группе AB(IV). Если исследуемая кровь оказалась AB(IV), группы проводится дополнительное контрольное исследование со стандарт­ной сывороткой AB(1V) группы. При отсутствии агглютинации иссле­дуемой крови с сывороткой AB(IV) группы данную кровь можно от­нести к четвертой группе.

Примечание: Во всех сомнительных случаях необходимо про­вести повторное исследование с гемагглютинирующими сыворотками другой серии.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГРУППЫ КРОВИ ДВОЙНОЙ РЕАКЦИЕЙ (ПО СТАНДАРТНЫМ СЫВОРОТКАМ И СТАНДАРТНЫМ ЭРИТРОЦИТАМ) (перекрестный способ)

Суть метода - с помощью стандартных изогемагглютинирую­щих сывороток определяется наличие или отсутствие в исследуемой крови групповых антигенов А и В, а с помощью стандартных эритро­цитов наличие или отсутствие в плазме групповых антител аир. Стандартные эритроциты представляют собой 10-20 % взвесь эритро­цитов 0(1), А(II) и В(III) групп в цитратно-физиологическом растворе. Их готовят из крови доноров с заранее известной группой крови, хра­нят при +4-8°С. Срок годности 2-3 дня.

Материальное оснащение: стандартные сыворотки 0(1), А(II), В(III), групп двух серий, стандартные эритроциты 0(1), А(II), В(III) групп, изотонический раствор хлорида натрия, иглы, тарелки, стек­лянные палочки или предметные стекла, пипетки, песочные часы, ре­зиновые перчатки, маска, очки, клеенчатый передник.

Методика выполнения:

1. Надеть маску и передник, обработать руки антисептиком для обработки рук, надеть перчатки и защитные очки.

2. Взять 3-5 мл исследуемой крови в пробирку без стабилизато­ра. Кровь должна отстояться, или ее центрифугируют для получения сыворотки.

3. На планшет нанести по две капли стандартных сывороток группы 0(1), А(II), В(III), двух серий.

4. Соответственно каждой группе сывороток расположить по одной капле стандартных эритроцитов группы 0(1), А(II), В(III).

5. В стандартные сыворотки добавить по одной капле испытуе­мой крови, а в стандартные эритроциты - по две капли испытуемой сыворотки.

6. Капли перемешать углом предметного стекла, всякий раз из­меняя угол так, чтобы не произошло смешивание разных сывороток и разных эритроцитов.

7. Покачивая планшет в руках в течение 5 минут, следят за на­ступлением агглютинации.

Оценка результатов:

При трактовке результатов оценивают данные, полученные при обеих реакциях (со стандартными изогемагглютинирующими сыво­ротками и стандартными эритроцитами)

1. Эритроциты группы О (I) являются контрольными, агглюти­нация с ними не происходит.

2. Агглютинация со стандартными эритроцитами А и В и нет агг­лютинации в трех стандартных сыворотках двух серий - в исследуемой сыворотке присутствуют оба агглютинина а и β, а в испытуемых эритро­цитах нет агглютиногенов, т. е. кровь относится к группе 0(I).

3. Агглютинация со стандартными эритроцитами группы В(III) и со стандартной сывороткой группы 0(1), В(III) - в исследуемых эритроцитах имеется агглютиноген А, а в сыворотке исследуемой крови - агглютинин β. Следовательно, кровь относится к группе А(II).

4. Агглютинация со стандартными эритроцитами группы А(II) и со стандартной сывороткой группы А(II), 0(1) - в исследуемых эрит­роцитах имеется агглютиноген В, а в исследуемой сыворотке - агглю­тинин а. Следовательно, кровь относится к группе В(III).

5. Нет агглютинации со стандартными эритроцитами и есть агглю­тинация со стандартными сыворотками - в исследуемых эритроцитах имеются оба агглютиногена А и В, а в сыворотке исследуемой крови от­сутствуют оба агглютинина кровь относится к группе AB(IV).

Примечание. Результат перекрестного способа считается дос­товерным только в случае совпадения ответов о группе исследуемой крови и со стандартными изогемагглютинируюшими сыворотками и со стандартными эритроцитами. При несовпадении результатов обе реакции необходимо переделать.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГРУППОВОЙ ПРИНАДЛЕЖНОСТИ КРОВИ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ АНТИТЕЛ

Определение группы крови можно произвести с помощью мо­ноклональных антител (МКА). Для определения агглютиногенов эритроцитов используют стандартные реагенты цоликлоны антн-А и антн-В. Получают моноклональные антитела с применением гибри- домной битехнологии. Гибридома - это клеточный гибрид, возник­ший в результате слияния клетки опухоли костного мозга (миеломы) с иммунным лимфоцитом, синтезирующим специфические монокло­нальные антитела. Гибридома приобретает свойства обоих «родите­лей»: способность к неограниченному росту, характерную для опухо­левой клетки, и возможность синтезировать антитела, присущую им­мунному лимфоциту. Цоликлоны анти-А и анти-В продуцируются двумя различными гибридомами. Они предназначены для определе­ния группы крови системы АВО человека взамен стандартных изоге­магглютинирующих сывороток. Цоликлоны анти-А (красного цвета) и анти-В (синего цвета) выпускаются как в нативной, так и в лиофилизированной форме в ампулах по 20, 50, 100, 200 доз с растворителем, при­ложенным к каждой ампуле по 2, 5, 10, 20 мл соответственно. Лиофилизированный порошок разводят изотоническим раствором хлористого натрия непосредственно перед исследованием. Для каждого определения группы крови применяют по одной серии реагента анти-А и анто-В.

Материальное оснащение: цоликлоны анти-А и анти-В, изото­нический раствор хлорида натрия, иглы, тарелки, стеклянные палочки или предметные стекла, пипетки, песочные часы, резиновые перчатки, маска, очки, клеенчатый передник.

Методика выполнения:

1. Надеть маску и передник, обработать руки антисептиком для обработки рук, надеть перчатки и защитные очки.

2. Убедиться в пригодности цоликлонов, донорской крови.

3. На тарелке написать Ф. И. О. донора и реципиента.

4. Вскрыть ампулы с цоликлонами, растворителями, смешать все с помощью отдельных шприцев, разлить цоликлоны во флаконы с пипеткой (анти-А - красный, анти-В - синий).

5. Взять кровь реципиента и донора.

6. В две лунки под соответствующими надписями: анти-А или анти-В нанести по 1 капле (0,1мл) цоликлонов: в первую - цоликлон анти-А, во вторую - цоликлон анти-В.

7. Отдельным концом стеклянной палочки или отдельной пи­петкой для каждой лунки перенести каплю крови в 10 раз меньше ка­пли цоликлона с предметного стекла в лунку и смешать с каплей цоликлона до гомогенного пятна.

Наверняка каждый хотя бы раз в жизни сталкивался с анализом на определение группы крови. О том какие существуют способы определения группы крови и каким из них лучше всего проводить тест на принадлежность к тому или иному виду – тема сегодняшней статьи.

Зачем проводят исследование на группу крови?

В современной гематологии, под группой крови понимают специфический набор антигенов, расположенных на поверхности эритроцитов, определяющий их специфичность. Данных антигенов существует огромное количество (обычно, используется таблица групп со всевозможными антигенами), однако, во всем мире признана классификация крови по системе АВ0 и резус-фактору.

Группа крови обязательно определяется при подготовке к любым операциям. В число обязательных контингентов, в которых проводится определение группы крови, входят военные, работники силовых структур и внутренних органов. Данное мероприятие необходимо, так как в случае развития ургентного состояния (угрожающего жизни) может возникнуть необходимость в переливании, когда не будет времени проводить анализ и тест на ее совместимость с донорской.

Определение групп крови стандартными методами

Существует множество различных техник, но в клинических лабораториях чаще всего используют методику стандартных сывороток. Как определить группу крови по стандартным сывороткам?

Этот метод применяется для определения антигенов системы АВ0. Стандартная изогемагглютинирующая сыворотка имеет в своем составе набор специфических антител к поверхностным молекулам эритроцитов. При наличии антигена, на которое распространяется действие антител, происходит образования комплекса антиген-антитело, что провоцирует запуск каскада иммунных реакций. Ее результат - агглютинация эритроцитов, на основании характера агглютинации судят можно сделать заключение об отнесении образца к той или иной группе крови.

Стандартные сыворотки готовят из донорской крови по определенной системе - путем выделения плазмы с присутствующими в ней антителами и ее последующего разведения. Разведение проводят с помощью изотонического раствора натрия хлорида.

Разведение проводится следующим образом – в пробирку с 1 мл 0.9 процентного раствора пищевой соли добавляют 1 мл плазмы и тщательно перемешивают раствор. После, пипеткой отбирают 1 мл полученного раствора плазмы и добавляют его во вторую пробирку, содержащую изотонический раствор. Таким образом, достигается разведение плазмы в соотношении 1:256. Использование других разведений может привести к появлению диагностической ошибки.

Техника проведения исследования следующая – на специальный планшет для определения группы крови помещают по одной капле (общим объемом около 0.1 мл) каждой сыворотки в область с соответствующей пометкой (используются сыворотки двух образцов, среди которых один является контрольным, а второй используется для исследования). После этого, возле каждой капли сыворотки помещают исследуемый образец (0.01 мл), после чего он по отдельности смешивается с каждым видом диагностикума.

Через некоторое время (в среднем, около 5 минут) проводят анализ полученных результатов с описанием характера произошедшей реакции:

• если в исследуемом образце происходит агглютинация – тест положительный;
• если агглютинации нет, то реакция отрицательна.

Проще говоря, наличие агглютинации говорит о том, что в крови имеется необходимый набор агглютиногенов, и если она произошла, значит кровь принадлежит к той группе, антитела к которой содержатся в сыворотке. На основании полученных результатов строится таблица или схема, которая визуально отображает результаты.

Метод перекрестной реакции

Данная техника заключается в определении агглютиногенов с помощью цоликлонов или стандартных сывороток с параллельным выявлением агглютининов при помощи эталонных эритроцитов.

Методика проведения практически не отличается от определения группы крови при помощи сывороток, однако, есть некоторые дополнения.

На планшетку ниже нанесенных сывороток добавляют по одной малой капле стандартных эритроцитов. После этого, из пробирки, содержащей прошедшую через центрифугу кровь пациента, извлекают с помощью пипетки плазму, которую добавляют к стандартным эритроцитам, а находящиеся на дне ее эритроциты вносят в стандартную сыворотку.

Также как и при методике стандартных сывороток, полученные результаты оценивают через несколько минут после начала реакции. При наличии агглютинации в стандартных сыворотках судят о наличии агглютининов системы АВ0, а при развитии реакции плазмы со стандартными эритроцитами – об имеющихся агглютиногенах.

Перекрестный метод получил широкое распространение благодаря тому, что он предотвращает основные диагностические ошибки при определении крови стандартными методиками.

Определение группы цоликлонами

К использованию цоликлонов прибегают при невозможности определения антигенов системы АВ0 при помощи стандартных сывороток.

Цоликлоны – специфические антитела, полученные путем гибридизации их в живом организме (обычно, используются цоликлоны, полученные от мышей путем модификации В-лимфоцитов). Характерной их особенностью является развитие иммунной реакции между цоликлоном и антигеном А или В, расположенном на поверхности мембраны эритроцита.

Алгоритм использования моноклональных антител следующий: на планшетку наносится по одной крупной капле раствора цоликлонов (обязательно следует пометить, где и какие цоликлоны находятся). После этого, к сыворотке добавляют по одной капле исследуемой крови и оценивают полученные результаты через несколько минут.

Тест должен проводиться в специально созданных условиях с соблюдением температурного режима и влажности (перед тем, как провести данный анализ, необходимо убедиться в пригодности цоликлонов).

Тест считается положительным, если в исследуемом образце произошла агглютинация эритроцитов (т.е. прошла реакция между антителом и антигеном). Если положительный результат наблюдается в двух каплях, судят о принадлежности образца к IV группе. Если же наоборот, реакции не произошло ни в одном образце, то группа крови предположительно I. Ошибки при определении крови данной методикой встречаются редко.

Экспресс-методика “Эритротест”

Несмотря на то, что общепринятые методики определения групповой принадлежности крови повсеместно распространены, в настоящее время широко внедряются в медицинскую и лабораторную практику экспресс-методы определения группы крови. Одним из них является “Эритротест”.

Комплект для определения группы крови “Эритротест-группокарт” состоит из следующих компонентов:

• универсальная планшетка с пятью лунками для проведения определения группы по системе АВ0 и ее резус-принадлежности;
• скарификатор для получения образца для исследования;
• чистая пипетка с помощью которой проводят набор растворов;
• стеклянные палочки, использующиеся для перемешивания образцов.

Все перечисленное оснащение необходимо для правильного проведения экспресс диагностики.

Данная методика позволяет проводить определение группы крови и резус-фактора в любых условиях, особенно если нет возможности использовать классические методы.

Процесс проведения анализа с использованием методики «Эритротест»

В лунках планшетки находятся цоликлоны к поверхностным антигенам (цоликлоны анти-А, анти-В, анти-АВ), а также к основному антигену, обуславливающему наследование резус-фактора (цоликлон анти-D). В пятой лунке находится контрольный реагент, позволяющий предотвратить ошибки и правильно провести анализ на групповую принадлежность.

Для оценки полученных результатов используется специальная таблица, в которой перечислены всевозможные результаты исследования.